应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 跪求指点HPR与TMB的显色反应
71/1返回列表
查看: 3857  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看

yun880305t

新虫 (初入文坛)

[求助] 跪求指点HPR与TMB的显色反应

本人最近在做HPR与TMB的显色反应实验，开始按照JACS上一篇文章配置TMB工作液（TMB用DMSO配成1mg/ml，然后与0.1M柠檬酸、0.2M Na2HPO4的混合溶液按1：9混和），这之后直接就出现了蓝色沉淀。然后第二次在网上寻求别人帮助找到一个TMB工作液配置方法（A液：Na2Ac 13.6g，柠檬酸1.6g，30%双氧水0.3ml，蒸馏水加至500ml。 B液：EDTA Na2 0.2g，柠檬酸0.95g，甘油50ml，取0.15gTMB溶于3mlDMSO中，蒸馏水加至500ml。使用时去A B等体积混合），这一方法发现当我直接用HEMIN与TMB工作液混合时，直接就变成了浅蓝色溶液（没有沉淀）。跪求哪位高手指点迷津，并且好心透漏下您亲自验证过的TMB工作液配置方法，感激不尽。
注：本人是化学专业的，做的并不是ELISA检验，只是需要TMB的显色信号。
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

【分子生物】EPI帖

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-07-14 12:54:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zsy1106

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+5): Good！ 2011-07-14 16:52:10
yun880305t(金币+5): 谢谢你的帮助 先给你5个金币 新人ING 等我赚够了10个再给你5555 2011-07-15 00:34:22
不是显色液配方的问题，而是你的试剂中某个成分或多个成分被HRP污染了，而且看你的描述，污染应该还不轻。建议换掉所有的母液，重新配吧。配置这类试剂要十分小心，接触到的各类容器与耗材都要很干净，一定避免接触到HRP还有重金属。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2011-07-14 14:03:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yun880305t

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by zsy1106 at 2011-07-14 14:03:54:
不是显色液配方的问题，而是你的试剂中某个成分或多个成分被HRP污染了，而且看你的描述，污染应该还不轻。建议换掉所有的母液，重新配吧。配置这类试剂要十分小心，接触到的各类容器与耗材都要很干净，一定避免接 ...

谢谢你的帮助....我开始也怀疑是不是被污染了 但是我后来直接用TMB的DMSO溶液加入Na2HPO4溶液也直接出现了蓝色沉淀，难道他们俩会反应？...很是苦恼啊，我不太懂生物实验方面，请问配置母液的容器与试剂除了高温杀菌之外还要其他特殊处理吗？
赞一下 回复此楼
3楼2011-07-15 00:30:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zsy1106

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
dhd997(金币+3, EPI+1): 一并奖励，欢迎交流 2011-07-15 10:35:50
yun880305t(金币+5): 谢谢您的耐心解答，第一次碰DNA酶就遇到这问题 以后有阴影了~o~！ 2011-07-15 19:44:39
呵呵，金币无所谓了。而且看了你后面的补充描述，我有点质疑我之前的看法了。一个一个说吧。
1、在没有HRP存在的情况下，TMB可以被缓慢的氧化而逐渐呈色，但这个过程耗时挺长的，所以楼主说AB液混合后立即就显色并且有沉淀，我才怀疑是HRP污染了。
2、但后面你说的“直接用TMB的DMSO溶液加入Na2HPO4溶液也直接出现了蓝色沉淀”就比较奇怪了，因为即使TMB被HRP污染，但在无氧化剂的情况下，是不应该会有反应的。所以我也想不明白为什么会这样了。
3、配置溶液的容器主要是要干净，用超纯水多洗几遍。如果不涉及到生产，是否灭菌倒是无所谓。
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2011-07-15 10:15:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

674406238wx

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by zsy1106 at 2011-07-15 10:15:52
呵呵，金币无所谓了。而且看了你后面的补充描述，我有点质疑我之前的看法了。一个一个说吧。
1、在没有HRP存在的情况下，TMB可以被缓慢的氧化而逐渐呈色，但这个过程耗时挺长的，所以楼主说AB液混合后立即就显色并 ...

请问你用的TMB是它的盐酸盐吗？
赞一下 回复此楼
5楼2013-05-13 11:30:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

674406238wx

银虫 (小有名气)
请问你用的TMB是它的盐酸盐吗？我现在也想做这个实验
赞一下 回复此楼
6楼2013-05-13 11:35:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

逍潇

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 674406238wx at 2013-05-13 11:35:46
请问你用的TMB是它的盐酸盐吗？我现在也想做这个实验

请问你最后用的是TMB还是它的盐酸盐？我最近也有这个困惑。
赞一下 回复此楼
7楼2015-05-31 16:21:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 yun880305t 的主题更新
71/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 投票:  有多少人是今天查系统知道结果的？ +16 爱看书的可乐 2026-08-26 18/900 2026-08-29 23:40 by winsaint
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 5/250 2026-08-29 21:44 by 4qO8zhfjr2AX
[博后之家] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 5/250 2026-08-29 21:22 by 4qO8zhfjr2AX
[公派出国] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +4 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 6/300 2026-08-29 17:30 by 4FFAWE8HcgUD
[基金申请] 为什么到现在没收到通知？ +4 tannykie 2026-08-29 4/200 2026-08-29 17:14 by lmz0216
[基金申请] 麻烦专家们看看评委们的意见（F口面上） +5 gdd2018 2026-08-28 10/500 2026-08-29 14:10 by Jacob678
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 4/200 2026-08-29 14:02 by jCd0dEvKHShX
[基金申请] 国自然评审意见 +13 wangmingqi 2026-08-28 19/950 2026-08-29 10:22 by Poppy1104
[基金申请] 我就是申请一个面上项目而已，这评审意见是按照杰青的条件评的吧？ +6 gouxfjh 2026-08-28 9/450 2026-08-29 09:59 by jklily
[基金申请] 为什么资助数各大高校都创新高，自己申请怎么就这么难 +12 Kittylucky 2026-08-27 13/650 2026-08-29 00:04 by superceng
[基金申请] 面上合作单位盖章 +5 ssyjh 2026-08-27 5/250 2026-08-27 20:50 by gdfollow
[文学芳草园] 梦想 +3 myrtle 2026-08-26 3/150 2026-08-27 10:01 by angelyueyi
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +23 koalala 2026-08-24 26/1300 2026-08-26 14:29 by 宝贝虫子
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
[基金申请] 为什么国自然不能直接公布 +4 bjdxyxy 2026-08-26 4/200 2026-08-26 13:12 by qingmu1201
[基金申请] 国合里面能看到了 +7 一怀馨秋 2026-08-26 7/350 2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
[基金申请] 国合可查了 +3 paperzjh 2026-08-26 3/150 2026-08-26 10:41 by LemmonTr
[基金申请] 明天应该可查了！？ +6 chengyan1220 2026-08-23 6/300 2026-08-25 19:45 by zfd97
[基金申请] 如果此刻你正在为国基感到焦虑，不妨来听听这首《基金之外》 +8 scalable 2026-08-24 8/400 2026-08-25 12:52 by jnhyjjm
[基金申请] 没有任何消息-是不是就凉了 +9 图啦图啦 2026-08-24 10/500 2026-08-25 11:59 by 南海小哥
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭