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【求助】常用显色剂有哪些
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| 请教各位各位大虾，常用的显色剂有哪些，碘熏和香草醛浓硫酸的显色原理是什么，适用什么化合物，谢谢！ |
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常用显色剂多了去了，看你是要用于鉴别什么了。 碘蒸气是通用显色剂，对很多化合物都显黄棕色。碘显色过程中由碘蒸气分子与化合物发生结合而显色。 香草醛浓硫酸显色原理是使羧基脱水，增加双键结构，再经双键位移，双分子缩合等反应生成共轭双键系统，又在酸作用下形成阳碳离子盐而显色。 比如：（1）矾酸铵一浓硫酸溶液（Mandelin试剂）为1％矾酸铵的浓硫酸溶液。如遇阿托品显红色，可待因显蓝色，士的宁显紫色到红色。 （2）钼酸铵一浓硫酸溶液（Frohde试剂）为1％钼酸钠或钼酸铵的浓硫酸溶液，如遇乌头碱显黄棕色，小檗碱显棕绿色，阿托品不显色。 （3）甲醛一浓硫酸试剂（Marquis试剂）为30％甲醛溶液0.2ml与10ml浓硫酸的混合溶液。如遇吗啡显橙色至紫色，可待因显红色至黄棕色。 （4）浓硫酸 如遇乌头碱显紫色、小檗碱显绿色，阿托品不显色。 （5）浓硝酸 如遇小檗碱显棕红色，秋水仙碱显蓝色，咖啡碱不显色。 (1) 重络酸钾-硫酸:检查一般有机物. 喷洒剂:5克重络酸钾溶于100毫升40%硫酸中. 薄层检查:喷洒后加热到150℃至班点出现 (2) 荧光素-溴:检查不饱和化合物 喷洒剂:0.1克荧光素溶于100毫升乙醇中 溴试剂:5%的溴的四氯化碳溶液 喷洒后处理:喷洒荧光素溶液后,放置存有溴溶液的缸内,可于紫外线分析灯下检查荧光,荧光素与溴化和成曙红(Eosin)(无萤光),而不饱和化合物则成溴加成物,保留了原有荧光;若点样较多,则呈黄色斑点,底板呈红色. (3) 碘:检查一般有机物. 方法:a 层析谱放密闭缸内或瓷盘内，缸内预先放有碘结晶少许，大部分有机化合物呈棕色斑点。 B 层析谱放碘蒸气中5分钟（或喷5％碘的氯仿溶液）取出置空气中待过量的碘蒸气全部挥发后，喷1％淀粉的水溶液，斑点转成蓝色。 （4）硫酸：通用 喷洒剂：5％的浓硫酸乙醇溶液，或15％浓硫酸正丁醇溶液，或浓硫酸－醋酸（1：1）喷洒后处理：空气中干燥15分钟，再热至110℃直至出现颜色或荧光。 （5）硝酸银－氢氧化铵（Tollen-Zaffaroni）试剂：检查还原性物质。 溶液I : 0.1%N硝酸银; 溶液II: 5N氢氧化铵 喷洒剂: I和II以1:5混合(临用前混合) 喷洒后处理: 105℃加热5~10分钟,至深黑色斑点出现. (6)磷钼酸或磷钨酸,硅钨酸:检查还原性物质,类脂体,生物碱,甾体 喷洒剂: 5~10%磷钼酸或磷钨酸或硅钨酸乙醇溶液 喷洒后处理: 120℃加热至斑点出现. 沉淀试剂: 1克硅钨酸溶于20毫升水中,加10%盐酸至强碱性. 生物碱 (7)硫酸??=硫酸:检查生物碱及含碘化合物 喷洒剂: 0.1克硫酸?混悬于4毫升水中,加入1克三氯醋酸,加热至沸,逐滴加入浓硫酸至澄清. 喷洒后处理: 110℃加热数分钟至斑点出现. (8)碘化铋钾(Dragendorff)试剂:检查生物碱及其他含氟化合物. 溶液I: 0.85克次硝酸铋溶于10毫升冰醋酸40毫升水中 溶剂II: 8克碘化钾溶于20毫升水中. 制备液I+II,等体积混合.可用于棕色瓶中保存较长时间,一般制备液可作沉淀试剂用. 喷洒液: 制备液1毫升与2毫升醋酸,10毫升水混合即得 (9).碘化汞钾(Mayer)试剂: 检查生物碱. 制备液: 13.55克氯化汞和49.8克碘化钾各溶于20毫升水中,等体积混合并用水稀释至1000毫升. 喷洒液: 制备液加1/10体积的17%盐酸. 喷洒后处理: 观察斑点,并于紫外线荧光分析灯下检出. (10) ?酸纳-浓硫酸(Mandelin)试剂:检查生物碱. 1%>酸纳的浓硫酸溶液.与多种生物碱呈不同颜色. (11)碘－碘化钾(Wagner)试剂:检查生物碱. 1克碘及10克碘化钾,溶于50毫升水中,加热,加2毫升醋酸,再用水稀释至100毫升. 可作纸层板显色剂,液可作沉淀试剂. 酚类,鞣质 (12)三氯化铁:检查酚类及??酸. 喷洒剂:1~5%三氯化铁的水溶液或乙醇溶液.并加盐酸少许.??酸呈红色斑点,酚类称蓝色或绿色斑点. (13)铁氰化钾-三氯化钾:检查酚类,芳香胺类及还原性物质. 喷洒剂: 1%铁氰化钾水溶液,2%三氯化铁水溶液.临用前等体积混合. 喷洒后处理: 喷洒后酚性物质呈蓝色斑点.再喷2N盐酸,能使颜色加深,纸谱可用烯盐酸洗去喷洒液. (14) 4-胺基安替比林-铁氰化钾(Emerson反应): 检查酚类. 喷洒剂: I . 2%4-氨基安替比林乙醇溶液; II. 8%铁氰化钾水溶液. 或用0.9%4-氨基安替比林和5.4%铁氰化钾水溶液 方法: 先喷洒I,再喷洒II,即显色,或再放入密闭缸中,缸内放25%氢氧化铵,即产生橙色至深红色. (15) 对氨基苯磺酸,重氮盐(Pauly试剂): 检查酚类,芳香胺类及能偶合的杂环化合物. 喷洒剂: 4.5克对氨基苯磺酸,加热溶于45毫升12N盐酸中,用水稀释至500毫升,取10毫升稀释液用冰冷却,加10毫升冷4.5%亚硝酸钠水溶液,0℃放15分钟(此试剂于0℃可保存3天),用前加等体积1%碳酸钠水溶液. 一般重氮化试剂,也可用联苯胺,对硝基苯胺等. (16) 对甲苯磺酸: 检查甾体,黄酮,鞣质. 喷洒剂: 20%对甲苯磺酸氯仿溶液. 喷洒后处理: 100℃加热数分钟,紫外线分析灯下检查荧光斑点. 含氧杂环及蒽醌类* (17) 三氯化铝: 检查黄酮体. 喷洒1%三氯化铝乙醇液于紫外线荧光分析灯下检示,呈黄色荧光 (18)碱式醋酸铅: 检查黄酮体. 喷洒剂: 饱和碱式醋酸铅(或饱和醋酸铅)水溶液. 于紫外线荧光分析灯下检查荧光斑点. (19)醋酸镁: 检查蒽醌甙,甙元及黄酮体 喷洒剂: 0.5%醋酸镁甲醇溶液 方法: 90℃加热5分钟,呈红色至紫色斑点. (20)氢氧化钾: 检查香豆素,蒽醌甙及甙元 喷洒剂: 5~10%氢氧化钾的甲醇溶液. 于日光及紫外线荧光分析灯下检示斑点. 萜类,甾体 (21) 三氯化锑(Carr-Price试剂): 检查甾体,萜类,皂类. 喷洒剂: 25克三氯化锑溶于75克氯仿中(亦可以用氯仿或四氯化碳的饱和溶液). 喷洒后处理: 100℃加热5分钟,于紫外线荧光分析灯下检示荧光. (22) 五氯化锑: 检查甾体,萜类,皂甙. 喷洒剂: 五氯化锑-氯仿或四氯化碳(1:4),用前新鲜配制. 喷洒后处理: 120℃加热至斑点出现,并于紫外线荧光分析灯下检示. (23)香兰醛-硫酸: 检查高级醇类,酚类,甾体,萜类,芳香油. 喷洒剂: 1克香兰素溶于100毫升浓硫酸,或0.5克香兰醛溶于100毫升硫酸-乙醇(4:1)中. 喷洒后处理: 室温或120℃加热观察显色斑点. (24) 4-二甲氨基苯甲醛,醋酸,磷酸(E.P.试剂): 检查? Azulene 及?前体 Proazulene. 喷洒剂: 0.25克4-二甲氨基苯甲醛,溶于50毫升醋酸5克85％磷酸和20毫升水的混合液中(棕色瓶中保存数月) ?:烃室温即成蓝紫色斑点,>前体于80℃加热10分钟出现蓝紫色斑点. (25) 氯胺T－三氯醋酸: 检查强心甙. 喷洒剂: I. 3%氯仿T水溶液新鲜制备. II. 25%三氯醋酸乙醇溶液(能保存数天). 10毫升I加40毫升II,用前混合. 喷洒后处理: 110℃加热7分钟,紫外线荧光分析灯下检示呈蓝色或黄色荧光. (26) 亚硝酸基铁氰化钠-氢氧化钠(Legal试剂): 检查不饱和内酯;甲基酮或活性次甲基,常用于强心甙 喷洒剂: 1克亚硝基铁氰化钠溶于100毫升2N氢氧化钠-乙醇(1:1)的水溶液. 显红色或紫色斑点. (27) 3,5-二硝基苯甲酸(Legal试剂): 检查强心甙,α,β-不饱和内酯. 喷洒剂: 1克3,5-二硝基苯甲酸溶于50毫升甲醇,加入1N氢氧化钾50毫升. 强心甙呈紫红色斑点. 糖类 (28) 邻苯二甲基苯胺: 检查还原糖. 喷洒剂: 0.93克苯氨,1.66克邻苯二甲酸溶于100毫升水饱和的正丁醇中. 喷洒后处理: 105℃加热10分钟. (29) 2,3,5-Triphenyl-tetrazolium chloride (T.T.C.)：检查还原糖及其他还原物质。 溶液I：4％（T.T.C.）甲醇溶液； 溶液II：1N氢氧化钠。 喷洒液：I，II，临用前等体积混合。 喷洒后处理：100℃加热5～10分钟，得红色斑点。 （30）Keller-Kiliani试剂：检查α－去氧糖，常用于强心甙。 试液：100毫升冰醋酸加三氯化铁试液0.5毫升混合均匀. 试样1毫克加试液2毫克溶解后,沿试官管壁滴入浓硫酸2毫升,接触面即显棕色,渐变浅绿,蓝色.最后冰醋酸层全部燃呈蓝色. (31) 1,3-二羟基萘-磷酸: 检查糖类. 喷洒液: 0.2%1,3-二羟基萘(Naphthoresorcinol)乙醇溶液100毫升,与10毫升85%磷酸混合. (32) 费林溶液(Fehling): 检查还原糖. 溶液I: 69.3克结晶硫酸铜溶于1000毫升水中. 上述二溶液如不清可滤过.临用前等体积混合. 氨基酸 (33) 茚三酮: 检查氨基酸及氨基糖. 喷洒剂: 0.3克茚三酮溶于100毫升正丁醇,加入3毫升醋酸;或0.2克茚三酮溶于100毫升乙醇(或丙酮中). 喷洒后处理: 110℃加热至斑点出现. (34) 吲哚醌: 检查氨基酸和一些肽. 喷洒剂: 0.2%吲哚醌(Isatin)丙酮溶液,含4%醋酸;或用100毫升1%吲哚醌丙酮溶液加10毫升醋酸. 喷洒后处理: 100~110℃加热10分钟. (35) 1,2-萘醌-4-硫磺酸(Folin试剂): 检查氨基酸. 喷洒剂: 新鲜制备0.02克1,2-萘醌-4-磺酸钠,溶于100毫升5%碳酸钠中. 喷洒后处理: 室温放于,不同氨基酸出现不同颜色. 有机酸 (36) 酸碱指示剂: 检查有机酸. 喷洒剂: 0.05%溴酚蓝(或溴甲酚绿,或溴麝香草酚蓝)的乙醇溶液. (37) 氧化还原显色剂: 检查有机酸. 喷洒剂: I. 0.075%溴甲酚绿及0.025%溴酚蓝的无水乙醇液. II. 0.5%高锰酸钾及1%碳酸钠.10H2O的蒸馏水液.临用前,取I和II按1:1混合后喷酒. 喷酒后处理: 稳定时间为5~10分钟.对不同的有机酸在纸谱上呈现不同颜色. (38) ??? (Acridine): 检查酸. 喷洒剂: 0.005%的??乙醇溶剂. 紫外线分析灯下呈黄色荧光. (39) 芳香胺-还原糖: 检查酸. 喷洒剂: 芳香胺(如苯氨5克)和还原糖(如木质糖5克)溶于50%含水乙醇中. 喷洒后处理: 125~130℃加热出现棕色斑点 一、通用试剂 1、碘试剂 检查一般有机化合物。 （1）碘蒸气 预先将盛有碘结晶的小杯置于密闭的玻璃容器内，使容器空间被碘蒸气饱和，将薄层置于容器内数分钟即显棕色斑点。有时，于容器中加放一小杯水，增加容器内的湿度，可提高显色的灵敏度。 （2）0.5％碘的氯仿溶液 喷洒试剂，置空气中待过量的碘挥发后，喷1％淀粉溶液，斑点由棕色转为蓝色。 2、硫酸试剂 检查一般有机化合物。 5％硫酸乙醇溶液作为色谱显色剂用。喷洒后，置空气中干燥15min，100℃烤至斑点呈色（不同化合物呈不同颜色）。 3、重铬酸钾—硫酸试剂 检查一般有机化合物。 5g重铬酸钾溶于l00ml40％硫酸中。喷该试剂后，150℃加热至斑点出现(不同化合物呈不同颜色)。 4、磷钼酸试剂 检查还原性成分。 5％磷钼酸乙醇溶液。喷洒后，120℃加热至呈蓝色斑点。 5、磷钨酸试剂 检查还原性成分 20％磷钨酸乙醇溶液。喷洒后，120℃烘烤，还原性物质呈蓝色斑点。 6、硝酸银—氢氧化铵试剂 检查还原性成分。 溶液I：0.1mol／L硝酸银溶液。溶液Ⅱ：10％氢氧化铵溶液。临用前溶液I和Ⅱ以 1︰5混合。喷洒后105℃加热5~l0min，至深黑色斑点出现。 7、中性高锰酸钾试剂 检查易还原性成分。 0.05％高锰酸钾溶液。喷洒后粉红色背景上显黄色斑点。 8、碱性高锰酸钾试剂 检查还原性成分。 溶液I：1％高锰酸钾溶液。溶液Ⅱ：5％碳酸钠溶液。溶液I和Ⅱ等量混合使用，喷洒后，粉红背景上显黄色斑点。 9、四唑蓝试剂 检查还原性成分。 溶液I：0．5％四唑蓝甲醇溶液。溶液Ⅱ：25％氢氧化钠溶液。临用前两液等量混合。喷洒后，微热或室温放置显紫色斑点。 10、荧光素—溴试剂 检查不饱和化合物。 溶液I：0.1g荧光素溶于l00ml乙醇中。溶液Ⅱ：5g溴溶于l00ml四氯化碳中。先喷洒溶液I，然后将薄层板放入盛有溶液Ⅱ的缸内，黄色斑点出现后，于紫外光灯下检视，红色底板上显黄色荧光斑点。 11．荧光显色试剂 检查一般有机化合物。 （1）0.2％2，7--'氯荧光素乙醇溶液。 （2）0.01％荧光素乙醇溶液。 （3）0.1％桑色素乙醇溶液。 （4）0.05％罗丹明B乙醇溶液。 喷洒任一溶液，不同的化合物在荧光背景上可显黑色或其它荧光斑点。 二、苷类鉴定试剂 1、糖鉴定试剂 （1） －萘酚－硫酸试剂 检查还原糖。 ①溶液I：10％ —萘酚乙醇溶液。溶液Ⅱ：硫酸。取lml样品的稀乙醇溶液或水溶液，加入溶液I 2～3滴，混匀，沿试管壁缓缓加入少量溶液Ⅱ，二液面交界处产生紫红色环为阳性反应。 ②15％ —萘酚乙醇溶液21m1、硫酸13ml、乙醇87ml及水8ml混匀后使用。喷洒于薄层板上，100℃烤3～6min，多数糖显蓝色，鼠李糖显橙色，所显颜色于室温可稳定2天～3天。 （2）斐林试剂 检查还原糖。 ‘ 溶液I：6.93g结晶硫酸铜溶于l00ml水中。溶液Ⅱ：34.6g酒石酸钾钠、10g氢氧化钠溶于l00ml水中。取lml样品热水提取液，加入4～5滴用时配制的溶液Ⅰ、Ⅱ等量混合液，在沸水浴中加热数分钟，产生砖红色沉淀为阳性反应。如检查多糖和甙，取lml样品水提液，加入lmll0％盐酸溶液，在沸水浴上加热l0min，过滤，再用10％氢氧化钠溶液调至中性，按上述方法检查还原糖。 （3）氨性硝酸银试剂 检查还原糖。 硝酸银1g，加水20ml溶解，小心滴加适量氨水，边加边搅拌，至开始产生的沉淀将近全部溶解为止，过滤。取lml样品的水溶液，加入lml试剂，混匀后，40℃微热数分钟，管壁析出银镜或产生黑色沉淀为阳性反应。本试剂也可作为色谱显色剂，喷洒后于110℃加热数分钟，显棕黑色斑点为阳性反应。还原性物质如醛类、邻二酚类等有干扰。 （4）茴香醛－硫酸试剂 检查糖类化合物。 硫酸lml加到含茴香醛0.5ml的乙酸溶液50ml中，需临用前配制。喷洒于薄层板上，105℃加热至显示色斑，不同糖显不同颜色。 （5）苯胺－邻苯二甲酸试剂 检查糖类化合物。 苯胺0.93g和邻苯二甲酸1.66g溶于100ml水饱和的正丁醇中。作色谱显色剂用。喷后105℃烤5min，显红棕色斑点。 （6）l,3－二'羟基萘酚－磷酸试剂 检查酮糖、醛糖。 0.2％1，3--'二羟基萘酚乙醇溶液50ml与85％磷酸50ml混合均匀后使用。喷后105℃烤5min～10min，酮糖呈红色，醛糖显淡蓝色。 （7）苯胺－二苯胺－磷酸试剂 检查糖类化合物。 苯胺4ml、二苯胺4g及85％磷酸20ml溶于丙酮200ml中。喷洒于薄层板上，85℃加热10min，不同糖显不同颜色。 （8）2，3，5－三苯基氯化四氮唑(T．T．C)试剂 检查还原糖。 溶液Ⅰ：4％T．T．C甲醇溶液。溶液Ⅱ：4％氢氧化钠溶液。临用时将溶液Ⅰ和Ⅱ等体积混合。喷洒后，100℃加热5～10min，显红色斑点为阳性反应(醛类无干扰)。 （9）三氯化铁－冰醋酸(K．K)试剂 检查 －去氧糖，常用于强心甙。 溶液I：1％三氯化铁溶液0.5ml，加冰醋酸至l00ml。溶液Ⅱ：硫酸。取样品乙醇提取液lml，置试管中，水浴上蒸去乙醇，残渣用0.5ml溶液I溶解，沿试管壁缓缓加入溶液Ⅱlml，静置分层，上层渐显蓝色，下层显红色或棕色为阳性反应(其颜色随苷元羟基和双键的位置和个数不同而不同)。 （10）占吨氢醇试剂 检查 －去氧糖(常用于强心甙)。 10mg占吨氢醇溶于100ml冰醋酸中，再加入lml硫酸混合。取lml样品，加入试剂lml，置水浴上加热30min，显红色为阳性反应。 （11）Gregg-Gisvold试剂 检查2．6－去氧糖。 溶液I：10％三氯化铁溶液。溶液Ⅱ：1％盐酸甲醇溶液(97.2ml甲醇中含2．8ml盐酸)。0.5ml溶液I与100ml溶液Ⅱ混合。将样品的乙醇溶液点于滤纸片上，晾干后，喷洒上述混合试剂，110℃加热5min，显蓝色为阳性反应。 （12）3，5－二氨基苯甲酸－磷酸试剂 检查2－去氧糖。 3，5－二氨基苯甲酸二盐酸盐1g溶于80％磷酸25ml，加水稀释至60ml。喷洒后，100℃加热15min，2－去氧糖在日光下显棕色，在紫外光下显黄绿色荧光。 （13）对硝基苯胺－过碘酸试剂 检查去氧糖。 溶液I：饱和偏高碘酸溶液1份加水2份混匀。溶液Ⅱ：1％对硝基苯胺乙醇溶液4份与盐酸1份混合。先喷溶液I，放置10min，再喷溶液Ⅱ，去氧糖显黄色，紫外光下显强荧光，再喷5％氢氧化钠甲醇溶液，颜色转绿，乙二醇同样显色。 2、酚类鉴定试剂 （1）三氯化铁试剂 检查酚类化合物、鞣质。 1～5％三氯化铁水溶液或乙醇溶液，加盐酸酸化。取1m1样品的乙醇溶液，加入试剂1～2滴，显绿、蓝绿或暗紫色为阳性反应。作色谱显色剂用，喷洒后，显绿或蓝色斑点为阳性反应。 · （2）4－氨基安替匹林－铁氰化钾(Emerson)试剂 检查酚羟基对位无取代基的化合物。 溶液I：2％4－氨基安替匹林乙醇溶液。溶液Ⅱ：8％铁氰化钾溶液。作色谱显色剂用，先喷洒溶液I，再喷洒溶液Ⅱ，用氨气熏，显橙红或深红色斑点为阳性反应。 （3）Gibbs试剂 检查酚羟基对位无取代基的化合物。 溶液I：0.5％2，6－溴(氯)苯醌氯亚胺的乙醇溶液。溶液Ⅱ：1％氢氧化钾乙醇溶液。取lml样品的乙醇溶液，滴加溶液Ⅱ，使pH9～10，再加入1滴～2滴溶液I，显深蓝色为阳性反应。 （4）铁氰化钾－三氯化铁试剂 检查酚类、芳香胺类及还原性物质。 溶液I：1％铁氰化钾溶液。溶液Ⅱ：2％三氯化铁溶液。临用前等体积混合。喷洒后酚性成分呈蓝色斑点，再喷20％盐酸，能使颜色加深。纸色谱可用稀盐酸洗去喷洒液。 （5）重氮化(Pauly)试剂 检查酚羟基对位无取代基化合物。 溶液I：0.35g对硝基苯胺溶于5ml盐酸中，加水稀释至50ml。溶液Ⅱ：5g亚硝酸钠溶于70ml水中。取1m1样品的乙醇溶液，加入1m13％碳酸钠溶液，在沸水浴中加热3min，再在冰水浴中冷却后，加入1～2滴溶液Ⅰ与Ⅱ的混合液(临用时，在冰水浴中等量混合)，显红色为阳性反应。作色谱显色剂用，将溶液I与Ⅱ各l0ml混合，再加20ml 1％碳酸钠溶液(均临用时在冰水浴中混合)，喷洒后，显黄、红、紫等色斑点为阳性反应。 （6）牢固蓝B盐试剂 检查酚类化合物。 溶液I：新配的0.5％牢固蓝B盐的溶液。溶液Ⅱ：0.5％氢氧化钠溶液。先喷溶液I，再喷溶液Ⅱ，呈棕、紫、或绿色者为阳性反应。能偶合的芳香胺类有干扰。 3．黄酮类鉴定试剂 （1）盐酸－镁粉试剂 检查黄酮（醇）、二氢黄酮（醇）类化合物。 取lml样品的乙醇溶液，加入数毫克镁粉，滴加数滴盐酸，必要时水浴上微热，显红－紫色为阳性反应。 （2）Shinoda试剂 采用含2％锌粉（W／W）－硅胶薄层板，展层后喷20％盐酸溶液，黄酮（醇）类呈红紫色。 （3）三氯化铝试剂 检查具有邻二酚羟基或3－羟基、4－酮基或5－羟基、4－酮基的黄酮类化合物。 1％三氯化铝乙醇溶液或5％三氯化铝乙醇溶液。喷洒前、后将薄层板置日光下和紫外光灯下观察，呈黄色或黄绿色荧光为阳性反应。也可在滤纸上和试管中进行。 （4）中性醋酸铅或碱式醋酸铅试剂 检查具邻二酚羟基或酚羟基的黄酮化合物。 饱和中性醋酸铅或碱式醋酸铅溶液。取1ml样品的乙醇溶液，加1～2滴试剂，产生黄色沉淀。 （5）锆－柠檬酸试剂 检查具3－羟基或5－羟基的黄酮类化合物。 溶液I：2％二氯氧锆甲醇溶液。溶液Ⅱ：2％柠檬酸甲醇溶液。取1mg样品，用甲醇溶解，加入溶液I lml，呈鲜黄色示有3－羟基或5－羟基；再加入溶液Ⅱ1m1，黄色不褪，示有3－羟基；黄色褪去，加水稀释后变为无色，示无3－羟基，但有5－羟基。也可在滤纸上进行，得到的锆盐络合物多呈黄绿色，并具荧光。 （6）氨性氯化锶试剂 检查具有邻二酚羟基结构的黄酮类化合物。 溶液I：1％氯化锶甲醇溶液。溶液Ⅱ：氨蒸气饱和的甲醇溶液。取1mg样品的甲醇溶液，加入3滴溶液I，再加3滴溶液Ⅱ，产生绿－棕－黑色沉淀为阳性反应。 （7）醋酸镁试剂 检查黄酮类、二氢黄酮类化合物，及羟基蒽醌类衍生物。 1％醋酸镁甲醇溶液。在滤纸或薄层板上，点1滴样品醇溶液，挥去醇后，点l滴试剂于样品斑点边缘，加热干燥，于紫外灯下观察，黄酮类显黄色荧光，二氢黄酮类呈天蓝色荧光。显橙红色为大黄素型蒽醌，显紫色为茜草型蒽醌。 （8）硼氢化钾试剂 检查二氢黄酮类化合物。 2％四氢硼钾的甲醇溶液。取样品1～2mg溶于甲醇中，加等量试剂lml后，加数滴盐酸，呈红-紫红色为阳性反应。薄层色谱上喷试剂，5min后放人盐酸蒸气槽内呈色。 4．醌类化合物鉴定试剂 （1）Borntrager试剂 检查羟基蒽醌衍生物。 2％氢氧化钠或2％碳酸钠溶液(或甲醇溶液)。取lml样品的乙醇溶液，加lml试剂，呈红色为阳性反应。在薄层色谱上喷洒试剂，显橙黄或红色斑点。黄酮类化合物遇碱也能反应生成黄、橙、红色等。 （2）菲格尔(Feigl)试剂 检查醌类衍生物。 溶液I：25％碳酸钠溶液。溶液Ⅱ：4％甲醛的苯溶液。溶液Ⅲ：5％邻二硝基苯的苯溶液，取1滴样品的苯溶液，加入上述3种试液各1滴，混匀，置水浴上加热l～4min，呈显著的紫色为阳性反应。 （3）硼氢化钠－二甲基甲酰胺试剂 检查蒽醌及其衍生物。 20g硼氢化钠溶于100ml二甲基甲酰胺中。作色谱显色剂用。喷洒试剂后，于紫外光灯下观察，显强的黄、绿或蓝色荧光为阳性反应。 （4）硼酸试剂 检查羟基蒽醌类化合物。 1％硼酸溶液。作色谱显色剂用，喷洒后，置紫外光灯下观察，呈黄、橙、红色荧光为阳性反应。 （5）对亚硝基二甲基苯胺试剂 检查蒽酮类衍生物。 0.1％对亚硝基二甲基苯胺的吡啶溶液。取1m1样品的乙醇溶液，置水浴上蒸干，残渣用吡啶溶解，再滴试剂数滴，显紫色或绿色为阳性反应。 （6）活性次甲基试剂 检查苯醌及萘醌类衍生物。 lg活性次甲基试剂(例如丙二酸酯、乙酰乙酸酯等)溶于30ml氨与乙醇的等体积混合溶液中。取5ml样品的乙醇溶液，加入3ml试剂，显蓝、紫或红色为阳性反应，萘醌分子中具羟基，可使反应减慢或不起反应。 5．内酯、香豆素类鉴定试剂 （1）开环－闭环试剂 检查内酯环。 溶液I：1％氢氧化钠溶液。溶液Ⅱ：2％盐酸溶液。取lml样品的乙醇溶液，加2ml溶液I，置沸水浴上加热3～4min，溶液比未加热时澄清。再加溶液Ⅱ酸化(pH2)，放置，溶液又变为混浊。酚性化合物和有机酸有干扰，但可用下法予以区别，取样品乙醇溶液数毫升，置水浴上蒸干溶剂，用乙酸乙酯溶解后置分液漏斗内，用5％氢氧化钠溶液萃取酚性及有机酸成分，乙酸乙酯溶液用水洗至中性后按上法检测。 （2）异羟肟酸铁试剂 检查内酯环。 溶液I：7％盐酸羟胺甲醇溶液(新鲜配制)。溶液Ⅱ：10％氢氧化钾甲醇溶液。溶液Ⅲ：1％三氯化铁甲醇溶液。取1m1样品的甲醇溶液，加入溶液I、Ⅱ各5滴，置沸水浴上加热3min～4min，冷却后，用稀盐酸调至pH3～4，再加入溶液Ⅲ1滴～2滴，显橙红或紫红色为阳性反应。作色谱显色用，将溶液I，Ⅱ等量混合，喷洒后空气中干燥10min，再喷溶于1％盐酸中的三氯化铁溶液，显橙红或紫红色斑点。 （3）稀氢氧化钠溶液 将检样点于滤纸片或薄层上，试样边缘点上碱液，晾干，置紫外灯光下观察，多数羟基香豆素有强的荧光。 配合酚类鉴定试剂的检查，以确定游离酚羟基的存在及取代位置。 6，强心甙鉴定试剂 （1）碱性3，5－二硝基苯甲酸(Kedde)试剂 检查强心甙的 、 －不饱和内酯环。 2％3，5－二硝基苯甲酸甲醇溶液与5％氢氧化钾溶液，用前按1︰l混合。取1m1样品的甲醇溶液，加入3～4滴试剂，显紫红色为阳性反应，几分钟后褪色。也适用于薄层色谱。 （2）碱性苦味酸(Baljet)试剂 检查强心甙的 、 －不饱和内酯环。 9ml 1％苦味酸乙醇溶液与1ml l0％氢氧化钠溶液用前配制混合。用1m1样品的乙醇溶液，加入1滴试剂，放置15min左右，显橙红色或红色为阳性反应。 （3）碱性亚硝酰铁氰化钠（Legal）试剂 检查不饱和内酯、甲基酮或活性亚甲基（常用于强心甙）。 溶液I：0.5％亚硝酰铁氰化钠乙醇溶液。溶液Ⅱ：10％氢氧化钠溶液。取1 m1样品的甲醇溶液，置水浴上蒸干，冷却后加lml吡啶溶解残渣，加入4～5滴溶液I和1～2滴溶液Ⅱ，溶液显红色并逐渐消失为阳性反应。用于薄层色谱检查，将1g亚硝酰铁氰化钠溶于10％氢氧化钠－乙醇（1︰1）的溶液中，喷洒后，显红色或紫色斑点。 （4）磷酸－溴试剂 检查强心甙。 溶液I：10％磷酸乙醇溶液。溶液Ⅱ：溴化钾饱和溶液－溴酸钾饱和溶液－25％盐酸溶液(1﹕l﹕1)。用于薄层色谱检查，取溶液I喷洒后，125℃加热12min，紫外光灯下观察。再将薄层板烤热，趁热喷溶液Ⅱ，不同的强心苷显示不同的颜色斑点。 （5）醋苷－硫酸（Liebermann-Burchard）试剂 检查甾体、甾体皂苷、三萜类及强心苷。 取0.1～0.2mg样品，置于白瓷反应板上，加入0.3ml醋酐，使样品溶解，沿边缘滴入硫酸，出现红－紫－蓝－绿色，最后褪色为甾体皂甙，三萜皂甙只能呈黄－红－紫等。 （6）三氯醋酸—氯胺T试剂 检查洋地黄毒甙元衍生物和2，6－去氧糖苷。 25％三氯醋酸乙醇（氯仿）溶液4ml与3％氯胺T溶液1ml混匀。喷洒后，100℃加热数分钟，于紫外光灯下观察。洋地黄毒甙元的苷类显黄色荧光，羟基洋地黄毒苷元的甙类显亮蓝色荧光，异羟基洋地黄毒苷元的苷类呈灰蓝色荧光。洋地黄毒糖的苷（2，6－去氧糖苷）在可见光下呈暗蓝色。 强心苷的鉴定应由苷元（甾体母核和不饱和五元内酯）和2－去氧糖两部分共同证实。 7、甾体、三萜及其苷的鉴定试剂 （1）三氯化锑试剂 检查甾体、萜类、皂苷。 25g三氯化锑溶于75ml氯仿中。喷后100℃加热5min，不同的皂苷元在可见光或紫外光灯下显不同颜色。 （2）三氯醋酸试剂 检查皂甙。 3.3g三氯醋酸溶于10ml氯仿，再加入1～2滴30％过氧化氢溶液。将样品的氯仿溶液滴在滤纸上，加试剂l滴，加热至60℃，生成红色－紫色为甾体皂甙；加热到100℃始见显色为三萜皂甙o （3）硫酸：甲醇（1︰1）试剂 喷后加热，不同皂苷元可显红褐色、紫色、黄色或黑色。所显颜色与温度无关。 （4）氯磺酸：乙酸（1︰1）试剂 喷后130℃加热5min，各种皂苷元可显天蓝色、 紫色、粉红色、淡棕色等，在紫外光灯下也显不同的荧光。 （5）香草醛－硫酸试剂 检查高级醇类、酚类、甾体、萜类、芳香油。 1g香草醛溶于100ml硫酸中，或0.5g香草醛溶于100ml硫酸－乙醇(4﹕1)中。喷洒后，室温、120℃加热观察，显示红、蓝、紫等各种颜色斑点。 8．氰苷鉴定试剂 （1）苦味酸试纸 取适当大小的滤纸，浸入苦味酸饱和溶液中，浸透后取出，晾干。再浸入10％碳酸钠溶液内，迅速取出，晾干即得。取样品粉末0.5g置试管中，加水混合均匀，加入稀硫酸数滴。在试管口夹放一条苦味酸试纸（试纸不能接触到药液），塞紧。将试管在沸水浴中加热数分钟，试纸变成红色，表明含氰苷。 （2）普鲁士蓝试验 溶液I：10％硫酸亚铁溶液（用前配制）。溶液Ⅱ：5％三氯化铁溶液。取样品粉末0.5g置试管中，加水湿润，立即用经10％氢氧化钾溶液湿润的滤纸将试管口包紧，于热水浴上加热10min后，在滤纸上加溶液I、稀盐酸和溶液Ⅱ各1滴，滤纸显蓝色为阳性。 三、挥发油鉴定试剂 1、茴香醛－硫酸试剂 硫酸1m1加至50ml冰醋酸中，冷却后加入茴香醛0．5ml(必须临用时配制)。喷洒后,105℃加热，挥发油中各成分显不同颜色。 2、碘化钾－冰醋酸－淀粉试剂 检查过氧化物。 溶液I：4％碘化钾溶液10ml与冰醋酸40ml混和，再加锌粉一小勺过滤。溶液Ⅱ：新制的1%淀粉溶液。先喷溶液I，5min后大量喷溶液Ⅱ，直至薄层透明为止。显蓝色斑点为过氧化物。 3、2，4-二硝基苯肼试剂 lg 2，4-二硝基苯肼、36％盐酸l0ml溶于1000ml乙醇中。喷洒后，显黄红色斑点为阳性反应。 4、硝酸铈试剂 检查醇类化合物。 硝酸铈6g溶于2.5％100 ml硝酸溶液中，喷洒后，黄色背景上显棕色斑点为阳性反应。 5、钒酸铵（钠）－8－羟基喹啉试剂 检查醇类化合物 1％钒酸铵（钠）溶液1ml和8－羟基喹啉的6％乙醇溶液1ml混和，用30ml苯萃取，分取灰蓝色的苯溶液为试剂。喷洒后，微加热，灰蓝色背景上显淡红色斑点为阳性反应。 挥发油组成复杂，需依据结构特征如醇、醛、酮、酚、醚、酯、内酯等选择鉴定试剂。 四、生物碱鉴定试剂 1、改良碘化铋钾试剂 为生物碱通用显色剂。 溶液I：0.85g次硝酸铋溶于10ml冰醋酸，加水40ml。溶液Ⅱ：8g碘化钾溶于20ml水中。溶液I和溶液Ⅱ等量混和，于棕色瓶中可以保存较长时间。目前市场上有碘化铋钾试剂可供直接配置：7.3g碘化铋钾、10ml冰醋酸加水60ml。取lml样品的稀酸溶液，加1滴～2滴试剂，产生桔红色浑浊或沉淀为阳性反应。作为薄层色谱显色剂，取混和液1ml、醋酸2ml、水10ml混和即得。喷洒后呈桔红色斑点为阳性反应。 2、碘化汞钾 为生物碱通用沉淀试剂。 1.36g氯化汞和5g碘化钾各溶于20 ml水中，将氯化汞溶液慢慢加入碘化钾溶液，混合后，加水至100ml。取lml样品的稀酸溶液，加1～2滴试剂，产生类白色沉淀为阳性反应。 3、硅钨酸试剂 为生物碱通用沉淀试剂。 1g硅钨酸溶于20 ml水中，加10％盐酸使成pH2左右。取1 ml样品的稀酸溶液，加入1～2滴试剂，产生白色至褐色沉淀为阳性反应。 4、碘化铂钾（碘铂酸）试剂 为生物碱通用沉淀试剂。 10％六氯铂酸3ml和97ml水混合，加6％碘化钾溶液100ml，混合均匀（临用前配制）。取1 ml样品稀酸溶液，加l～2滴试剂，不同生物碱显不同颜色沉淀。 5、碘—碘化钾试剂 为生物碱沉淀剂。 1g碘及10g碘化钾溶于50ml水中，加2ml醋酸，再用水稀释至100ml。取1 ml样品稀酸溶液，加入试剂1～2滴，产生棕色或褐色沉淀为正反应。 6、苦味酸试剂 为生物碱通用沉淀试剂。 苦味酸1g溶于100ml水中。取1 ml样品中性溶液，加入试剂1～2滴，产生黄色晶形沉淀。 7、鞣酸试剂 为生物碱通用沉淀试剂。 鞣酸1g用1ml乙醇溶解后，加水至10 ml 。取lml样品稀酸溶液，加入试剂1～2滴产生白色至棕黄色沉淀。 8、硫酸铈—硫酸试剂 检查生物碱及含碘化合物。 0.1g硫酸铈悬浮于4ml水中，加三氯醋酸1g，加热至沸，放冷，逐滴加入硫酸直到浑浊消失为止。喷洒试剂后，110℃加热数分钟，呈色（不同生物碱显不同的颜色）。 9、钒酸钠—硫酸试剂 检查生物碱。 1g钒酸钠溶于100ml硫酸中。喷洒试剂后，不同生物碱产生不同颜色，如莨菪碱显红色，马钱子碱显血红色，士的宁显蓝紫色，奎宁显淡橙色，吗啡显棕色等。 10、雷氏铵盐试剂 检查水溶性生物碱。 2％硫氰化铬铵溶液（临用时配制）。取1ml样品的弱酸性水溶液（pH5～6），加入1～2滴试剂，产生暗红色沉淀为阳性反应。 11、Ehrlich试剂 检查吡咯、吲哚类生物碱。 1g对二甲氨基苯甲醛溶于25ml 36％盐酸和75ml甲醇混合溶液中。取1ml样品的稀酸溶液，加人数滴试剂，加热，显紫红或青紫色为阳性反应。 五、鞣质类鉴定试剂 1、氯化钠—明胶试剂 检查鞣质。 1g明胶溶于50ml水中（60℃水浴中加热），加入10g氯化钠，使完全溶解后，用水稀释到100ml。取1m1样品的60℃水浸液，加入1～2滴试剂，产生白色浑浊或沉淀 2、对甲苯磺酸试剂。 检查鞣质、甾体、黄酮类。 20％对甲苯磺酸氯仿溶液。薄层色谱上喷洒试剂后，100℃加热5min显出不同颜色的斑点。 3、新鲜石灰水试剂 检查鞣质。 取1ml样品的热水提取溶液，加新鲜石灰水上清溶液数滴，产生青灰色沉淀为可水解鞣质，产生棕或棕红色沉淀为缩合鞣质。 六、氨基酸、多肽、蛋白质鉴定试剂 1、茚三酮试剂 检查2－氨基酸及含有2-氨基酸的肽类、氨基糖和蛋白质。 0.2g茚三酮溶于l00ml正丁醇中，加冰醋酸3ml。或者，0.2g茚三酮溶于l00ml乙醇或丙酮中。取1ml样品的冷水浸液，加入2～3滴试剂，沸水浴上加热5min放冷，显蓝色或蓝紫色。 2、吲哚醌试剂 检查氨基酸、多肽。 吲哚醌1g溶于100ml丙酮中，加入10ml醋酸。作薄层色谱显色剂，喷洒试剂后，100～110℃加热l0min，显蓝、红、桃红或棕色斑点。 3、1，2-萘醌－4－磺酸钠试剂 检查氨基酸。 0.02g l，2－萘醌－4－磺酸钠溶于l00ml5％碳酸钠溶液中，新鲜配制。喷洒试剂后，室温晾干，不同氨基酸出现不同的颜色。 4、双缩脲试剂 检查多肽、蛋白质。 七、有机酸鉴定试剂 1、溴酚蓝试剂 检查有机酸。 0.1％溴酚蓝的乙醇溶液。作薄层色谱显色剂，喷洒后，蓝色背景上呈黄色斑点。如不明显，可再喷氨水，然后暴露在盐酸气体中，则为黄色背景上呈蓝色斑点。 2、芳香胺—还原糖试剂 检查有机酸。 5g苯胺和5g木糖溶于100ml 50％乙醇中。作薄层色谱显色剂，喷洒试剂后， 125～130℃加热至出现棕色斑点。 3、吖啶试剂 检查有机酸。 0.005％的吖啶乙醇溶液。喷洒试剂后，于紫外光灯下观察，显黄色荧光。 |
10楼2012-08-28 17:06:51
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