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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 催化 » 催化反应 » 有关辣根过氧化物酶催化的TMB显色问题
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icesmile

新虫 (初入文坛)

[求助] 有关辣根过氧化物酶催化的TMB显色问题 已有2人参与

各位大侠，最近在做辣根过氧化物酶的一个相关实验，实验中发现不加酶，过氧化氢和显色指示剂TMB蓝色显得非常好，10分钟OD值能到2.0，请问这是什么原因？不加辣根过氧化物酶也能显色吗？
谢谢赐教啊！
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1楼 2014-08-01 00:06:13
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847356376

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
liwentao2010: 金币+1, 应助指数+1, 谢谢回帖，欢迎交流 2014-08-01 12:28:10
icesmile(liwentao2010代发): 金币+2 2015-01-15 20:26:55
可能是你的里面有什么金属离子吧，金属离子也能催发TMB-H2O2.你可以加EDTA后试试。我做过不加HRP基本没有吸光度啊，最多在0.05左右
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鹦鹉能说话，但是它却飞得不高，
2楼2014-08-01 09:23:38
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icesmile

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 847356376 at 2014-08-01 09:23:38
可能是你的里面有什么金属离子吧，金属离子也能催发TMB-H2O2.你可以加EDTA后试试。我做过不加HRP基本没有吸光度啊，最多在0.05左右

谢谢！有道理。还有一个问题是，实验室里的这瓶过氧化氢室温下未避光保存一段时间了，请问对结果会有什么影响呢？难道不低温避光保存，这瓶过氧化氢会让TMB产生蓝色？
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3楼2014-08-01 19:58:19
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ycy66ds

铁虫 (小有名气)
我也出现了此问题，不知道楼主解决了吗？求赐教，感谢~
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4楼2014-09-09 18:56:00
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bingyib

木虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

是不是不起作用，如果换换底物呢？
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5楼2014-10-24 22:06:36
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zhangjun1988

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
liwentao2010: 金币+1, 谢谢回帖，欢迎常来交流 2015-07-29 16:57:02
双氧水浓度太高也会氧化TMB
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为化学科研奋斗
6楼2015-07-29 14:32:30
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茗香薏然

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by zhangjun1988 at 2015-07-29 14:32:30
双氧水浓度太高也会氧化TMB

想请问一下亲有没有做过氧化氢酶模拟物的酶活性测定方面。有个问题就是算初速度与底物浓度的双倒数曲线时，那个TMB的摩尔吸光系数是多少？我看有的论文中写的是39000,用的是醋酸-醋酸钠缓冲液，要是用其他缓冲液的话，还能带这个数算么？
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7楼2016-01-11 20:45:13
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lsl624

金虫 (小有名气)
到目前为止有确定的解决方案了吗，关于这个问题？
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8楼2016-01-27 23:25:09
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shibin4234

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 847356376 at 2014-08-01 09:23:38
可能是你的里面有什么金属离子吧，金属离子也能催发TMB-H2O2.你可以加EDTA后试试。我做过不加HRP基本没有吸光度啊，最多在0.05左右

加EDTA能够避免金属离子的影响吗 大神求赐教啊！
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9楼2016-03-15 11:39:52
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