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xiaoyuehua

至尊木虫 (正式写手)

[交流] HRP催化底物，请问只有H2O2，没有底物？

HRP催化底物，请问只有H2O2，没有底物时，HRP能分解H2O2吗？
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1楼 2013-12-17 11:21:59
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
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gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-12-17 13:51:26
xiaoyuehua: 金币+1 2013-12-17 14:40:20
H2O2就是底物。HRP是horseradish peroxidase的简称，是过氧化物酶，催化H2O2分解成水和氧气。
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2楼2013-12-17 12:58:22
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hl16010921

木虫 (正式写手)
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xiaoyuehua: 金币+1 2013-12-17 14:56:27
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-01-27 19:52:56
HRP是双底物，除双氧水外其他底物很多，west常用的是鲁米诺，测活用的愈创木酚，Vc等等。一般都是显色法或荧光法。分解双氧水的是过氧化氢酶。以双氧水为氧化剂的是过氧化物酶。
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3楼2013-12-17 14:40:49
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xiaoyuehua

至尊木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by hl16010921 at 2013-12-17 14:40:49
HRP是双底物，除双氧水外其他底物很多，west常用的是鲁米诺，测活用的愈创木酚，Vc等等。一般都是显色法或荧光法。分解双氧水的是过氧化氢酶。以双氧水为氧化剂的是过氧化物酶。

那么请问HRP能否分解双氧水呢？
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4楼2013-12-17 14:56:13
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hl16010921

木虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by xiaoyuehua at 2013-12-17 14:56:13
那么请问HRP能否分解双氧水呢？...

说不好，推测在没有底物的情况下，单纯加双氧水和HRP，HRP可能会被氧化而催化中心分解最终失活，而这一过程中双氧水含量下降。至于是否有过氧化氢酶活性不好说，得查文献。
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5楼2013-12-17 15:51:02
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
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xiaoyuehua: 金币+1 2013-12-18 18:01:36
引用回帖:
3楼: Originally posted by hl16010921 at 2013-12-17 14:40:49
HRP是双底物，除双氧水外其他底物很多，west常用的是鲁米诺，测活用的愈创木酚，Vc等等。一般都是显色法或荧光法。分解双氧水的是过氧化氢酶。以双氧水为氧化剂的是过氧化物酶。

鲁米诺在氧的作用下发出荧光，用于western信号检测，与HRP没有关系，其它酶，只要能够产生氧的，都可以让鲁米诺发荧光。至于HRP的作用是催化双氧水产生氧，所以HRP的底物是双氧水。
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6楼2013-12-18 12:08:47
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hl16010921

木虫 (正式写手)
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xiaoyuehua: 金币+1 2013-12-19 21:12:27
引用回帖:
6楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-12-18 12:08:47
鲁米诺在氧的作用下发出荧光，用于western信号检测，与HRP没有关系，其它酶，只要能够产生氧的，都可以让鲁米诺发荧光。至于HRP的作用是催化双氧水产生氧，所以HRP的底物是双氧水。...

按你的说法，鲁米诺发光不应加双氧水，也不需要HRP标的二抗，因为空气中的氧气同样会使鲁米诺发光。HRP是辣根过氧化物酶，不是过氧化氢酶，是以双氧水底物催化氧化反应的。而直接分解双氧水的是过氧化氢酶（catalase）。
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7楼2013-12-18 19:38:53
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
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xiaoyuehua: 金币+1 2013-12-19 21:12:24
引用回帖:
7楼: Originally posted by hl16010921 at 2013-12-18 19:38:53
按你的说法，鲁米诺发光不应加双氧水，也不需要HRP标的二抗，因为空气中的氧气同样会使鲁米诺发光。HRP是辣根过氧化物酶，不是过氧化氢酶，是以双氧水底物催化氧化反应的。而直接分解双氧水的是过氧化氢酶（catala ...

实际上，空气里的氧气浓度在水溶液里不高，经HRP催化双氧水分解后溶液里的氧气的浓度迅速上升。而室温下鲁米诺会缓慢被空气中的氧气破坏而逐渐失效，所以试剂保存在4°C并避光。
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8楼2013-12-19 09:46:50
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