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xiaoyuehua

至尊木虫 (正式写手)


[交流] HRP催化底物,请问只有H2O2,没有底物?

HRP催化底物,请问只有H2O2,没有底物时,HRP能分解H2O2吗?
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)


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gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-12-17 13:51:26
xiaoyuehua: 金币+1 2013-12-17 14:40:20
H2O2就是底物。HRP是horseradish peroxidase的简称,是过氧化物酶,催化H2O2分解成水和氧气。
2楼2013-12-17 12:58:22
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hl16010921

木虫 (正式写手)


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xiaoyuehua: 金币+1 2013-12-17 14:56:27
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-01-27 19:52:56
HRP是双底物,除双氧水外其他底物很多,west常用的是鲁米诺,测活用的愈创木酚,Vc等等。一般都是显色法或荧光法。分解双氧水的是过氧化氢酶。以双氧水为氧化剂的是过氧化物酶。
3楼2013-12-17 14:40:49
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xiaoyuehua

至尊木虫 (正式写手)


引用回帖:
3楼: Originally posted by hl16010921 at 2013-12-17 14:40:49
HRP是双底物,除双氧水外其他底物很多,west常用的是鲁米诺,测活用的愈创木酚,Vc等等。一般都是显色法或荧光法。分解双氧水的是过氧化氢酶。以双氧水为氧化剂的是过氧化物酶。

那么请问HRP能否分解双氧水呢?
4楼2013-12-17 14:56:13
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hl16010921

木虫 (正式写手)


引用回帖:
4楼: Originally posted by xiaoyuehua at 2013-12-17 14:56:13
那么请问HRP能否分解双氧水呢?...

说不好,推测在没有底物的情况下,单纯加双氧水和HRP,HRP可能会被氧化而催化中心分解最终失活,而这一过程中双氧水含量下降。至于是否有过氧化氢酶活性不好说,得查文献。
5楼2013-12-17 15:51:02
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)


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xiaoyuehua: 金币+1 2013-12-18 18:01:36
引用回帖:
3楼: Originally posted by hl16010921 at 2013-12-17 14:40:49
HRP是双底物,除双氧水外其他底物很多,west常用的是鲁米诺,测活用的愈创木酚,Vc等等。一般都是显色法或荧光法。分解双氧水的是过氧化氢酶。以双氧水为氧化剂的是过氧化物酶。

鲁米诺在氧的作用下发出荧光,用于western信号检测,与HRP没有关系,其它酶,只要能够产生氧的,都可以让鲁米诺发荧光。至于HRP的作用是催化双氧水产生氧,所以HRP的底物是双氧水。
6楼2013-12-18 12:08:47
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hl16010921

木虫 (正式写手)


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xiaoyuehua: 金币+1 2013-12-19 21:12:27
引用回帖:
6楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-12-18 12:08:47
鲁米诺在氧的作用下发出荧光,用于western信号检测,与HRP没有关系,其它酶,只要能够产生氧的,都可以让鲁米诺发荧光。至于HRP的作用是催化双氧水产生氧,所以HRP的底物是双氧水。...

按你的说法,鲁米诺发光不应加双氧水,也不需要HRP标的二抗,因为空气中的氧气同样会使鲁米诺发光。HRP是辣根过氧化物酶,不是过氧化氢酶,是以双氧水底物催化氧化反应的。而直接分解双氧水的是过氧化氢酶(catalase)。
7楼2013-12-18 19:38:53
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cicelyzh

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xiaoyuehua: 金币+1 2013-12-19 21:12:24
引用回帖:
7楼: Originally posted by hl16010921 at 2013-12-18 19:38:53
按你的说法,鲁米诺发光不应加双氧水,也不需要HRP标的二抗,因为空气中的氧气同样会使鲁米诺发光。HRP是辣根过氧化物酶,不是过氧化氢酶,是以双氧水底物催化氧化反应的。而直接分解双氧水的是过氧化氢酶(catala ...

实际上,空气里的氧气浓度在水溶液里不高,经HRP催化双氧水分解后溶液里的氧气的浓度迅速上升。而室温下鲁米诺会缓慢被空气中的氧气破坏而逐渐失效,所以试剂保存在4°C并避光。
8楼2013-12-19 09:46:50
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