应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 各位师哥师姐帮帮我如何在我设计的引物上正切加入酶切位点
61/1返回列表
查看: 920  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

fyy1990

新虫 (初入文坛)

[求助] 各位师哥师姐帮帮我如何在我设计的引物上正切加入酶切位点 已有1人参与

我设计的引物，上游引物（5'-3'）ATGCCGGCCCACTTGCTG
                       下游引物（5’-3'）TCAGCCACTCTTGTAGCTCTCAT   我通过跑电泳得到了目的条带，大小也一致。但我需要做克隆连接这方面的试验，是与
   pcDNA3.1(+)质粒重组，需要在引物上加入酶切位点。我该选哪两种酶，如何重新设计引物呢？？
   求教！！！！！！！！！！！！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2015-07-02 17:13:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

2013101102

铜虫 (正式写手)
你要选择重组的方式呢还是双切双连？不同的方法不太一样。
赞一下 回复此楼
,越努力越幸运。
2楼2015-07-02 18:28:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Tama二等兵

新虫 (初入文坛)
重组后切连到目标载体？
赞一下 回复此楼
3楼2015-07-03 02:34:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fyy1990

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 2013101102 at 2015-07-02 18:28:12
你要选择重组的方式呢还是双切双连？不同的方法不太一样。

重组，
回复此楼
4楼2015-07-03 10:51:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fyy1990

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by Tama二等兵 at 2015-07-03 02:34:00
重组后切连到目标载体？

先于pMD19-T重组再与pcDNA3.1(+)连接
赞一下 回复此楼
5楼2015-07-03 10:53:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

2013101102

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
4楼: Originally posted by fyy1990 at 2015-07-03 10:51:09
重组，...

我们这重组都是选好酶切位点后加上载体序列，16个碱基做引物，拿这个引物跟你自身的引物放在一起，扩增后与切开的载体重组。此方法不用考虑序列的酶切位点。
赞一下 回复此楼
,越努力越幸运。
6楼2015-07-03 10:55:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 fyy1990 的主题更新
61/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 BMTdnp4OJO9f 2026-11-06 4/200 2026-11-07 19:36 by Xc2FxHsHkBNc
[论文投稿] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 BMTdnp4OJO9f 2026-11-06 5/250 2026-11-07 17:56 by Xc2FxHsHkBNc
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 5/250 2026-11-07 17:01 by Xc2FxHsHkBNc
[考研] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 4/200 2026-11-07 16:50 by Xc2FxHsHkBNc
[教师之家] 延安大学回应“副教授留绝笔信”：确已离世，正核实举报内容 +3 yexuqing 2026-11-04 5/250 2026-11-07 13:22 by 苏东坡二世
[公派出国] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-05 5/250 2026-11-06 16:43 by 5sJFDKp2kwuI
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 10/500 2026-11-06 16:23 by 5sJFDKp2kwuI
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 10/500 2026-11-06 16:12 by 5sJFDKp2kwuI
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +6 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 12/600 2026-11-06 16:10 by 5sJFDKp2kwuI
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +6 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 15/750 2026-11-06 13:49 by BkA9Bi5cMhkD
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +6 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 11/550 2026-11-06 13:47 by BkA9Bi5cMhkD
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +7 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 14/700 2026-11-06 13:47 by BkA9Bi5cMhkD
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +8 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 14/700 2026-11-06 13:36 by BkA9Bi5cMhkD
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-05 10/500 2026-11-06 12:32 by BkA9Bi5cMhkD
[硕博家园] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-05 5/250 2026-11-06 09:01 by 2lRNluKrJpwL
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +6 kvewwGtKktqB 2026-11-04 16/800 2026-11-06 05:00 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 12/600 2026-11-06 04:47 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 9/450 2026-11-06 02:02 by qL1cU46YIdK0
[考研] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +5 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 12/600 2026-11-06 01:42 by qL1cU46YIdK0
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 12/600 2026-11-05 11:10 by PYZmcHr5kSaq
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭