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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 各位师哥师姐帮帮我如何在我设计的引物上正切加入酶切位点
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fyy1990

新虫 (初入文坛)

[求助] 各位师哥师姐帮帮我如何在我设计的引物上正切加入酶切位点 已有1人参与

我设计的引物，上游引物（5'-3'）ATGCCGGCCCACTTGCTG
                       下游引物（5’-3'）TCAGCCACTCTTGTAGCTCTCAT   我通过跑电泳得到了目的条带，大小也一致。但我需要做克隆连接这方面的试验，是与
   pcDNA3.1(+)质粒重组，需要在引物上加入酶切位点。我该选哪两种酶，如何重新设计引物呢？？
   求教！！！！！！！！！！！！
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1楼 2015-07-02 17:13:48
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2013101102

铜虫 (正式写手)
你要选择重组的方式呢还是双切双连？不同的方法不太一样。
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,越努力越幸运。
2楼2015-07-02 18:28:12
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Tama二等兵

新虫 (初入文坛)
重组后切连到目标载体？
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3楼2015-07-03 02:34:00
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fyy1990

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 2013101102 at 2015-07-02 18:28:12
你要选择重组的方式呢还是双切双连？不同的方法不太一样。

重组，
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4楼2015-07-03 10:51:09
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fyy1990

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by Tama二等兵 at 2015-07-03 02:34:00
重组后切连到目标载体？

先于pMD19-T重组再与pcDNA3.1(+)连接
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5楼2015-07-03 10:53:01
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2013101102

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
4楼: Originally posted by fyy1990 at 2015-07-03 10:51:09
重组，...

我们这重组都是选好酶切位点后加上载体序列，16个碱基做引物，拿这个引物跟你自身的引物放在一起，扩增后与切开的载体重组。此方法不用考虑序列的酶切位点。
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,越努力越幸运。
6楼2015-07-03 10:55:07
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