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bw2318木虫 (小有名气)
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[交流]
测定溶液中多肽含量变化的方法，不知道有没有不用标品的？
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取 2. 5m l 样品溶液， 加入2.5ml 10%(W/V)的三氯乙酸(TCA)水溶液， 于漩涡混合仪上混合均匀， 静置 10min， 然后在 4000r/min 下离心15min， 将上清液全部转移到 50ml 容量瓶中， 并用 5%的 TCA 定容至刻度， 摇匀。 然后取 6.0ml 上述溶液置另一试管中， 加入双缩脲试剂 4.0ml(样液:双缩脲试剂=3:2， V/V)， 于漩涡混合仪上混合均匀， 静置 10min，2000r/min 离心 10min， 取上清液于 540nm 下测定 OD 值，对照标准曲线求得样品溶液中的多肽浓度 C(mg/ml)， 进而可求得样品中多肽含量。 标准曲线的制作取十个 10ml 的容量瓶， 用 5% 的 TCA 依次配制 0.0、0.2、 0.4、 0.6、 0.8、 1.0、 1.2、 1.4、 1.6 和 1.8mg/ml 的 Gly-Gly-Tyr-Arg 四肽标准溶液， 然后分别取 6.0ml标准溶液， 加入 4.0ml 双缩脲试剂，于漩涡混合仪上混合均匀， 静置 10min， 2000r/min 离心 10min， 取上清液于 540nm 下测定 OD 值(以第一管做空白对照)。 以肽的浓度为横坐标 X(mg/ml)， OD 值为纵坐标 Y，制作标准曲线(图 1)， 得到回归方程 y=0.3681x+0.0013， R2=1。 这是文献《蛋白水解液中多肽含量的测定方法》（食品科学）中的一个方法，里面会用到四肽标品，这种标品价格有点贵 我问了附近卖试剂的公司，100mg的价格定在1800元左右。所以感觉老板会有点意见，不知道虫友们，有没有做过这块的，有什么能替代的方法或标品价格比较低的渠道。请求指点。 |
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