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xzang3

新虫 (小有名气)

[交流] HILIC 柱 峰形拖尾 已有1人参与

我用HILIC柱做LCMS测试一些药品,有的峰形好,但是有的有拖尾,调了梯度也没有什么改变,流动项A:90%水10%乙腈 10mM乙酸胺,B:100%乙腈。请问有没有什么好的解决办法?
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kf1009

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xzang3: 金币+1 2015-06-17 10:17:39
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5楼: Originally posted by xzang3 at 2015-06-16 00:47:04
我测试的是乳酸的锂盐,不知道会不会因为盐类的原因? 之前还测试过tyrosine也拖尾。。...

可以考虑酸性流动相试试,比如乙腈:0.1%甲酸体系。
快乐不需要走遍天涯去寻找,只需播一粒种子在脚下。
6楼2015-06-16 08:54:49
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archbishop

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xzang3: 金币+1 2015-06-17 10:17:49
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4楼: Originally posted by xzang3 at 2015-06-16 00:45:49
0-3min 28%-55%A, 3-5min 55% A, flow rate 0.3ml/min...

7楼说的在理。你可以提高一下乙腈的比例。还有样品的溶剂最好是用纯乙腈。
另外,是哪种HILIC?
雲幕低垂映桂子,江月留白問柳心。
8楼2015-06-16 10:34:32
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superyeast

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xzang3: 金币+1 2015-06-18 04:52:39
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12楼: Originally posted by xzang3 at 2015-06-16 16:51:55
不知道我增大缓冲盐的浓度行不行,比如20 mM,虽然柱子说明建议用最大10mM

你要是确定在流动相里不会出沉淀可以适当加大些。不过我印象中90%ACN里溶10mM醋酸铵已经相当勉强了。

[ 发自小木虫客户端 ]
13楼2015-06-17 10:36:26
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archbishop

禁虫 (职业作家)

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xzang3: 金币+1 2015-06-18 04:52:16
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10楼: Originally posted by xzang3 at 2015-06-17 00:17:39
是开始的乙腈比例还是后面的?我之前试验过28%A 72%B 的等梯度也是拖尾,如果乙腈提高到95%以上的话会看不到乳酸,因为ACN有一些峰可能给掩盖了。。由于原来的乳酸钾盐溶解在水里,我不知道ACN是否可以全溶,不过我 ...

XBridge HILIC是没有键合相的,碱性化合物可能会拖尾。
另外,如果不是XBridge BEH的话流动相pH最好低一点。
雲幕低垂映桂子,江月留白問柳心。
14楼2015-06-17 11:38:45
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archbishop

禁虫 (职业作家)

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具体A和B是什么比例?

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
雲幕低垂映桂子,江月留白問柳心。
2楼2015-06-14 17:05:03
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kf1009

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xzang3: 金币+1 2015-06-17 10:18:19
拖尾与化合物性质相关,一般带伯胺的化合物拖尾严重。
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3楼2015-06-15 13:31:23
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xzang3

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2楼: Originally posted by archbishop at 2015-06-14 17:05:03
具体A和B是什么比例?

0-3min 28%-55%A, 3-5min 55% A, flow rate 0.3ml/min
4楼2015-06-16 00:45:49
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xzang3

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by kf1009 at 2015-06-15 13:31:23
拖尾与化合物性质相关,一般带伯胺的化合物拖尾严重。

我测试的是乳酸的锂盐,不知道会不会因为盐类的原因? 之前还测试过tyrosine也拖尾。。
5楼2015-06-16 00:47:04
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superyeast

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你的条件是文献给的还是自己随意的?HILIC很少用到那么高的水相呀。

[ 发自小木虫客户端 ]
7楼2015-06-16 09:23:36
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xzang3

新虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by superyeast at 2015-06-16 09:23:36
你的条件是文献给的还是自己随意的?HILIC很少用到那么高的水相呀。

是吗?我看柱子说明书上说可以试验95% ACN to 50% ACN的梯度,我试验了相似的梯度但是看不到乳酸,可能原因因为乳酸很早出来(Rt 0.88min),太多%ACN会有一些来自于ACN的峰导致ion suppression看不到乳酸,所以就选择了开始的28%A,才可以看到乳酸。
9楼2015-06-17 00:10:44
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xzang3

新虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by archbishop at 2015-06-16 10:34:32
7楼说的在理。你可以提高一下乙腈的比例。还有样品的溶剂最好是用纯乙腈。
另外,是哪种HILIC?...

是开始的乙腈比例还是后面的?我之前试验过28%A 72%B 的等梯度也是拖尾,如果乙腈提高到95%以上的话会看不到乳酸,因为ACN有一些峰可能给掩盖了。。由于原来的乳酸钾盐溶解在水里,我不知道ACN是否可以全溶,不过我可以试验一下~我用的是XBridge HILIC 2.5uM 2.1*75mm。还有不知道加大流速会不会有效??
10楼2015-06-17 00:17:39
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