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kitesuper

金虫 (初入文坛)

[求助] 重组大肠杆菌摇瓶不长,或摇碎死亡 已有3人参与

本人做重组大肠杆菌bl21(de3)摇瓶表达实验,前面四五个月做做好好的,最近把试管里活化的菌转到摇瓶里培养后,发现有的摇瓶里大肠杆菌摇瓶不长,有的开始长了但过一段时间好像都自溶碎掉死亡了。这是怎么回事,是菌种老化,还是噬菌体污染了?试管里的菌提过质粒,测过序都对。不知道问题出在哪里,求助!!!
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bugliuyun

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by snoopytbw at 2015-06-11 10:10:17
二个可能性,1 噬菌体污染 2 重组体系不适合该蛋白的表达,可能重组蛋白是水溶性的,过表达后也会引起细菌自溶

为什么水溶性蛋白的表达容易使菌体自溶呢?能给点解释吗?
6楼2016-03-25 20:07:01
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帷幕

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
镜检看看有没有杂菌,试管斜面扩大活化两批试试,同时做噬菌斑看看是不是噬菌体。
2楼2015-06-10 10:34:39
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snoopytbw

荣誉版主 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
二个可能性,1 噬菌体污染 2 重组体系不适合该蛋白的表达,可能重组蛋白是水溶性的,过表达后也会引起细菌自溶
3楼2015-06-11 10:10:17
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kitesuper

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 帷幕 at 2015-06-10 10:34:39
镜检看看有没有杂菌,试管斜面扩大活化两批试试,同时做噬菌斑看看是不是噬菌体。

镜检怎么做啊?
4楼2015-06-11 18:32:54
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