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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » 高效液相色谱（HPLC）基础问题
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lixiaobai11

新虫 (小有名气)

[交流] 高效液相色谱（HPLC）基础问题

小虫初次研究高效液相色谱（HPLC）但是不知道柱温， 流速，及进样量是怎样影响到 峰宽，峰面积和保留时间的，请高手指教。
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1楼 2015-06-08 14:46:52
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klicking

至尊木虫 (著名写手)
★
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柱温增加及流速增加，峰宽变小，峰面积变小，保留时间减小；反之，峰面积增加，保留时间增加。
进样量比较好理解，进样量增加，峰宽变大，峰面积增加，保留时间基本不影响（可忽略其影响），峰对称性可能会降低；反之同理。
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11楼2015-06-10 12:59:01
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old_yang

铁杆木虫 (著名写手)
★
lixiaobai11(金币+2): 谢谢参与
你配制几个样品（留着研究用），一次改变一个参数，例如柱温，20度，25度，30度，35度，40度等等，然后分别进样，再分析这些温度所对应的色谱峰；研究完温度，再改变流速，看看样品有没有变化？

大概就这样。
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5楼2015-06-08 15:08:39
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赈早见琥珀主

木虫 (正式写手)
★
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一般而言，柱温和流速的提高会使保留时间提前，样品峰宽变小。峰面积不太好说，可能变大也可能变小。
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7楼2015-06-08 15:29:12
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yyy911019

新虫 (小有名气)
★
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一般等度洗脱柱温越高，保留时间将缩短，，一般将柱温设置为高于室温10℃。。流速的话，文献上见到的很多都是1ml/min，如果你做的峰型和分离度都很好的话，可以适当提高流速，你也可以对流速做一个单因素考察，以确定最佳流速。。进样量要看你的进样环是多大的吧，，一般是20微升。。
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8楼2015-06-08 15:35:33
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