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多孔的水凝胶材料培养细胞后能否拍细胞在材料上的SEM 已有4人参与
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| 我刚做了一个大孔的多孔水凝胶，孔径在1mm左右，想问问大家，这种水凝胶材料是不是不可以拍细胞在材料上的SEM图片？有人说拍SEM前，材料的脱水处理，干燥，会导致固定在材料上的细胞裂掉？所以，想问问大家的水凝胶材料是不是都不能拍细胞与材料共培养的SEM？ |
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qingbo62
木虫 (正式写手)
- BM-EPI: 1
- 应助: 9 (幼儿园)
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- 专业: 高分子合成化学
2楼2015-06-08 06:10:57
【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
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没有问题！处理得当，完全可以！ 具体步骤如下： 1．细胞2*104/ml接种到材料上； 2．4,7,（3,5）天取样； 3．吸弃原有培养基； 4．加入1mLPBS培养基吹洗材料* 3次； ------------这步的目的是洗去细胞及材料表面杂质 5．吸弃PBS加入2.5-3.0% 戊二醛（固定2.5－3h）； -------这步的目的是将细胞内的细胞骨架，细胞器，蛋白质固定 6．吸弃戊二醛,30%,50%,75%,80%,95%,100%(两次)梯度乙醇脱水（15min/次）； ---------梯度脱水是在损伤最小的情况下将细胞内的水去掉，用酒精代替，使细胞内原本是水的地方充填酒精，保持细胞原有形貌 7．在玻璃瓶中乙酸异戊酯替换（大于30min）； -----------用乙酸异戊酯替换细胞内的酒精，是细胞内完全充填乙酸异戊酯，保持细胞原有形貌 8．临界点干燥后送扫描电镜观察。 --------出去可能存在的水分，以便上电镜，此时的细胞完全由乙酸异戊酯充填，保持原有形貌 SEM试验注意事项： 1.戊二醛现配现用； 2.用乙酸异戊酯替换时必须使用玻璃瓶；自然风干是绝对不允许的，风干细胞内的细胞器等会坍塌； 3.如果没有临界点干燥仪，也可用冷冻干燥机干燥！ 不用谢我！这也是小木虫上down来的！ |
3楼2015-06-08 10:37:00
4楼2015-06-08 10:42:13
5楼2015-06-08 10:44:42
liubin
专家顾问 (著名写手)
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专家经验: +125 - BM-EPI: 4
- 应助: 148 (高中生)
- 贵宾: 0.062
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- 红花: 31
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- 帖子: 2460
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- 虫号: 165666
- 注册: 2006-01-13
- 性别: GG
- 专业: 医用生物材料与植入科学
- 管辖: 生物材料
6楼2015-06-08 10:51:40