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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » cDNA的二倍体构建
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wangjuan211

新虫 (小有名气)

[求助] cDNA的二倍体构建 已有3人参与

试验需要构建cDNA的二倍体，我的cDNA是粘性末端，可是连接了两次均不成功，我的连接体系如下：
cDNA                           4微升
T4 DNA连接酶              1微升
2*rapid ligase buffer     5微升    4度过夜
体系应该是没有什么问题，之前实验室有人连接过了，可是我总也成功不了，所以来这向各位大神求助了，是否有人做过这类试验...
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1楼 2015-06-04 17:04:00
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bryantchow

禁虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
nono2009: 金币-10, 应助指数-1, 屏蔽内容, 违规存档, 严禁回帖广告 2015-06-08 13:43:35
本帖内容被屏蔽
2楼2015-06-04 20:25:09
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JNVBNC

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
NEB上写着16°过夜
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3楼2015-06-06 03:34:17
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wangjuan211

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by JNVBNC at 2015-06-06 03:34:17
NEB上写着16°过夜

我用的promega的T4，上面写着粘性末端4度过夜...
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4楼2015-06-15 19:56:10
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

搞同源重组咯，定向克隆，效率挺高的

[ 发自小木虫客户端 ]
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5楼2015-06-15 20:04:50
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wangjuan211

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by Neo2000 at 2015-06-15 20:04:50
搞同源重组咯，定向克隆，效率挺高的

这个实验室还真没做过...怎么做呢？
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6楼2015-06-15 21:31:47
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by wangjuan211 at 2015-06-15 21:31:47
这个实验室还真没做过...怎么做呢？...

查下酵母双杂文库的制备就知道了

[ 发自小木虫客户端 ]
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7楼2015-06-15 22:11:39
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JNVBNC

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by wangjuan211 at 2015-06-15 07:56:10
我用的promega的T4，上面写着粘性末端4度过夜......

哦 好吧 我用的是NEB的T4
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8楼2015-06-16 02:20:16
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