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临风7071

木虫 (正式写手)

[求助] TCA/acetone 沉淀蛋白,不溶解 已有1人参与

最近我用TCA/acetone沉淀浓缩植物蛋白,发现丙酮洗两次后,有白色的干粉物,也有褐色的胶状物,加入SDS-PAGE loading buffer, 褐色物溶解不了。请问这褐色的蛋白质么,还是植物多糖,酚类物质? 白色干粉物应该是蛋白质吧。我是粗蛋白提取液 大概20ug总蛋白,加入终浓度20%TCA沉淀,然后acetone洗两次。结果就出现褐色物。难道植物多糖,酚也能被TCA沉淀吗?求解答啊。PS,之所以要浓缩蛋白,是因为我的蛋白提取液(拟南芥根)浓度低(0.2ug/ul),要上总量20ug,就得上好多样,泳道根本上不了。所以就浓缩了。蛋白主要用于1D SDS-PAGE电泳,不是双向。可是结果。。。。。
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calorimetry

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

浓缩干嘛非要用有机试剂哪?先用millpore离心管(注意选择滤膜的孔径)上离心机低温超滤,可以多次操作,然后冻干,再溶解后比就行了。
3楼2015-06-03 10:17:29
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calorimetry

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
这褐色的蛋白质么,还是植物多糖,酚类物质?

用红外傅里叶变换光谱测定一下特征基团的吸收峰就可以确定。
2楼2015-06-03 10:10:18
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sherry_wang

木虫 (正式写手)

你好,最近我也想提取蛋白质,想请问一下,提取试剂你自己配的吗?还是买的试剂盒
4楼2016-05-17 09:32:54
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