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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 层析/纯化 » TCA/acetone 沉淀蛋白，不溶解
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临风7071

木虫 (正式写手)

[求助] TCA/acetone 沉淀蛋白，不溶解 已有1人参与

最近我用TCA/acetone沉淀浓缩植物蛋白，发现丙酮洗两次后，有白色的干粉物，也有褐色的胶状物，加入SDS-PAGE loading buffer， 褐色物溶解不了。请问这褐色的蛋白质么，还是植物多糖，酚类物质？ 白色干粉物应该是蛋白质吧。我是粗蛋白提取液 大概20ug总蛋白，加入终浓度20%TCA沉淀，然后acetone洗两次。结果就出现褐色物。难道植物多糖，酚也能被TCA沉淀吗？求解答啊。PS，之所以要浓缩蛋白，是因为我的蛋白提取液（拟南芥根）浓度低（0.2ug/ul），要上总量20ug，就得上好多样，泳道根本上不了。所以就浓缩了。蛋白主要用于1D SDS-PAGE电泳，不是双向。可是结果。。。。。
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1楼 2015-06-03 04:54:33
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calorimetry

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这褐色的蛋白质么，还是植物多糖，酚类物质?

用红外傅里叶变换光谱测定一下特征基团的吸收峰就可以确定。
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2楼2015-06-03 10:10:18
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calorimetry

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

浓缩干嘛非要用有机试剂哪？先用millpore离心管（注意选择滤膜的孔径）上离心机低温超滤，可以多次操作，然后冻干，再溶解后比就行了。
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3楼2015-06-03 10:17:29
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sherry_wang

木虫 (正式写手)
你好，最近我也想提取蛋白质，想请问一下，提取试剂你自己配的吗？还是买的试剂盒
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4楼2016-05-17 09:32:54
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