24小时热门版块排行榜    

查看: 2233  |  回复: 3

123n

木虫 (正式写手)

[交流] gateway BP反应 长出的单菌落 假阳性!! 已有3人参与

目的片段1300bp左右! 通过attB整合到一个载体上(利用gateway BP酶 kit),然后通过抗性平板筛选!提质粒,PCR检测均为假阳性,PCR出来的片段大约不到3000bp!!!   为何???求解答啊!!!!!!
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

镜子的诱惑

铜虫 (小有名气)

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2015-05-03 14:18:34
目的片段1300左右,pcr产物不到3000?不是用目的片段的引物进行PCR反应吗,那就可能是没有连到载体上,所以扩不出来。建议1重新连接。2多挑取单菌落,菌液培养后直接菌液pcr检测,有一次我挑取50个,但检测只有3个阳性。祝成功!
2楼2015-04-30 11:15:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

393658000

金虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
2楼: Originally posted by 镜子的诱惑 at 2015-04-30 11:15:33
目的片段1300左右,pcr产物不到3000?不是用目的片段的引物进行PCR反应吗,那就可能是没有连到载体上,所以扩不出来。建议1重新连接。2多挑取单菌落,菌液培养后直接菌液pcr检测,有一次我挑取50个,但检测只有3个阳 ...

你这阳性率也太差了吧  50个才3个,

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
3楼2015-05-02 09:40:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Huobol

至尊木虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
用的什么载体啊,pDONR221用M13F和M13R检测,菌液PCR挺好用的,退火60℃可以的;attB-pcr条带单一的话,纯化回收比较好,25℃连接反应,多几个小时,应该很好做的。我的平板上就长两个菌,拿去测序都是正确的,幸运一些!
让羽毛再飞一会儿
4楼2015-07-02 23:43:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 123n 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +5 瞬息宇宙 2026-08-10 6/300 2026-08-10 10:38 by Tide man
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +9 Lanmanbaby 2026-08-09 17/850 2026-08-10 10:35 by Tide man
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
[基金申请] 关于代码变化问题,想知道的进来 +15 且听虎啸 2026-08-07 22/1100 2026-08-09 22:13 by 布布和一二
[基金申请] filecode与中标关系的预测 +5 布布和一二 2026-08-07 5/250 2026-08-09 16:15 by 袁向阳007
[基金申请] fileCode有新解读? +10 Tide man 2026-08-08 18/900 2026-08-09 12:55 by 仁砚薪传
[基金申请] 关于filecode,很负责任的告诉大家 +6 爱看书的可乐 2026-08-08 7/350 2026-08-08 22:13 by a_niu
[考博] 【2027博士申请】纳米药物递送方向 20+3 13586093586 2026-08-03 5/250 2026-08-08 21:54 by 13586093586
[基金申请] 关于豆爷回答的JTJC与%2F数量 +5 yang182083 2026-08-06 7/350 2026-08-08 18:29 by zhanghaozhu
[基金申请] 国基金的申报应该改成非等额制,评价高的钱多评价低的钱少,但是增加资助率 +7 a089 2026-08-07 7/350 2026-08-08 18:05 by gltch
[基金申请] 关于filecode +4 布布和一二 2026-08-07 7/350 2026-08-07 22:55 by zhanghaozhu
[基金申请] 娱乐 +6 Tide man 2026-08-03 6/300 2026-08-07 22:40 by 铁帽子农民
[基金申请] 化学口download_prp&fileCode的固定段好像这几天一直没变,有变的大神么? +3 Tide man 2026-08-07 4/200 2026-08-07 22:39 by Tide man
[基金申请] 听说今天filecode变了 +24 布布和一二 2026-08-06 47/2350 2026-08-07 16:02 by zhiyanjiang
[基金申请] filecode变化情况 +6 布布和一二 2026-08-07 22/1100 2026-08-07 14:45 by 且听虎啸
[基金申请] 大家散了吧,后缀研究没有意义,别浪费时间了,过好目前的每一天,不要焦虑 +5 Tide man 2026-08-06 7/350 2026-08-07 13:11 by 医学老男孩
[基金申请] filecode +8 布布和一二 2026-08-06 11/550 2026-08-06 20:41 by tangpu318
[基金申请] 8月时间戳变的,举个手。玩一下,释放压力 +9 archvillain 2026-08-04 11/550 2026-08-05 20:06 by wlwhappy
[基金申请] 有没有H口的?有收到消息的吗? +3 超级海虾 2026-08-04 3/150 2026-08-04 17:26 by 学教育滴
[基金申请] 纯娱乐,不喜欢勿喷 +7 Tide man 2026-08-04 10/500 2026-08-04 15:10 by loufangrui
信息提示
请填处理意见