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111玲珑镇

新虫 (初入文坛)

[求助] 植物组织中酶的提取和测定 已有2人参与

最近在测植物中抗坏血酸氧化酶和谷胱甘肽还原酶活性的测定,第一次做,遇到了好多问题,希望大家帮忙解答一下。
    在测抗坏血酸过氧化物酶时,按照张以顺的《植物生理学实验教程》中的方法测定,但OD值一直是负值是怎么回事?书中是以不加酶液的作为对照,但是文献中很多是以不加过氧化氢的为对照,结果都不好,想问一下OD值得下降是测得AsA吗?反应液中PBS缓冲液会不会对AsA产生作用?空白对照具体应该怎么设置?
    还有就是测定时3min内OD变化很小,但反应时间久一点变化会快一些,这是什么原因?反应温度会不会有影响?测GR酶的温度是多少?
看到很多人在做,希望能得到大家的帮助,拜托了。
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
111玲珑镇: 金币+5, ★★★很有帮助 2015-05-11 09:47:47
1 调零时应当用反应体系溶液不加酶液,但考虑到酶液可能含有色素,用不加过氧化氢更好
2 OD值怎么变化我记不清了,看其他虫友答案
3 PBS没影响
4 实验空白对照仅将酶液换成提取缓冲液
5 调整酶液用量,做个预实验优化一下实验体系
6 温度有影响,但没有那么大,一般室温即可
植物生理群69993869,为避免广告,申请加入请提供木虫昵称,院校及专业信息
3楼2015-05-03 17:08:45
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拉拉果

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
111玲珑镇: 金币+2 2015-05-11 09:55:32
我也要做植物生理,导师让自己找实验方案,其实主要在于一些细节,希望咱们可以多交流
总要等到走完那段路,回头看的时候才会觉得两边的风景跟刚才来时有些不同。那些觉得过不去的,也许只是我们太倔强不愿意改变,也许只是我们习惯了那些不该习惯的
2楼2015-05-03 12:08:21
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111玲珑镇

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by starseacow at 2015-05-03 17:08:45
1 调零时应当用反应体系溶液不加酶液,但考虑到酶液可能含有色素,用不加过氧化氢更好
2 OD值怎么变化我记不清了,看其他虫友答案
3 PBS没影响
4 实验空白对照仅将酶液换成提取缓冲液
5 调整酶液用量,做个预实 ...

非常感谢您的帮助。之前的实验中也存在许多方面问题的干扰,不太有头绪,感谢您的耐心解答。
4楼2015-05-11 09:52:42
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长野

新虫 (初入文坛)

你好,我毕业也需要做GR的测定,但是实验方案我们图书馆里都没有张以顺的书,一直没办法写出方案来,请问你的方案还留着吗

发自小木虫Android客户端
5楼2017-07-01 00:29:12
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