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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 蛋白相互作用问题
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mofashishe

铜虫 (小有名气)

[求助] 蛋白相互作用问题已有1人参与

最近投稿一文章，陈述的是病原物的A蛋白与寄主的B蛋白相互作用的，在文中我提供了酵母双杂交、BiFC（还有共定位）和免疫共沉淀的数据都表明了这两个蛋白是可以相互作用的，但是评委一定要我补充promoter：GUS的数据证明寄主的B蛋白在病原物的侵染位点表达量提高。

我认为如果这个寄主的B蛋白是一类组织特异性表达蛋白的话则需要提供promoter：GUS的数据，但是文中我已经通过qPCR和WB证明了这个B蛋白是一类组成型蛋白，在所有组织中都有表达的，而且，也引用其他参考文献证明该蛋白是在所有组织中表达的。

我想问问我想问问promoter：gus的数据在证明两个蛋白之间的相互作用有什么意义的，病原物的蛋白与寄主的蛋白互作一定会提高该互作蛋白的表达的吗？有谁遇见过这种问题，怎么破啊？
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1楼2015-04-24 16:39:47
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starseacow

专家顾问 (职业作家)
引用回帖:
6楼: Originally posted by mofashishe at 2015-04-24 17:55:52
另外评委一直要我证明“Does the interaction between UsCP and AtCYS take place in the infection region?;”

这需要用什么实验来证明啊？

我的理解是用类似BiFC的方法在寄主上表达AtCYS-nYFP融合蛋白，在 ...

你不是已经做了BiFC吗？
你现有的结果证明两个蛋白有直接相互作用，同时BIFC可以部分指出相互作用发生位点。这时你再加GUS实验，证明微生物侵入可以造成蛋白在侵入位点附近高表达。结合这些结果，就可以推断这个相互作用发生在侵入位点。
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8楼2015-04-24 17:59:45
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
如果提供在侵染位点B蛋白大量富集的证据，可以有助于说明AB的蛋白互作参与病原侵染。不清楚你这篇文章是否着终于研究这个相互作用在生物胁迫中的意义，如果是，做review的建议很有意义。从这个角度考虑，B是否组织特异性并没有多大关系。
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2楼2015-04-24 16:45:49
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mofashishe

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by starseacow at 2015-04-24 16:45:49
如果提供在侵染位点B蛋白大量富集的证据，可以有助于说明AB的蛋白互作参与病原侵染。不清楚你这篇文章是否着终于研究这个相互作用在生物胁迫中的意义，如果是，做review的建议很有意义。从这个角度考虑，B是否组织特 ...

谢谢您的回复，但是A与B相互作用一定会促进B的表达吗，如果B的表达没有增加难道就不能证明、A与B之间的相互作用吗？

其实在文中我提供 了qPCR和WB数据表明了B的表达是会增加的，但是因为GUS方法太费时间了，所以才没做的。
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3楼2015-04-24 16:58:20
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
mofashishe: 金币+5, ★★★很有帮助 2015-04-24 17:40:51
引用回帖:
3楼: Originally posted by mofashishe at 2015-04-24 16:58:20
谢谢您的回复，但是A与B相互作用一定会促进B的表达吗，如果B的表达没有增加难道就不能证明、A与B之间的相互作用吗？

其实在文中我提供 了qPCR和WB数据表明了B的表达是会增加的，但是因为GUS方法太费时间了，所以 ...

我觉的review的重点是通过相互作用引起B在特定作用位点表达上升，表明B的富集参与生物胁迫，而不是单纯要再证明是否有相互作用发生，这是着眼于相互作用可能带来的生理意义。你用三种方法做相互作用已经很全面了。你的qPCR和WB只是证明B的整体水平上升，无法说明B是否高表达在AB作用部位。
至于AB相互作用是否引起B表达上升，这得看你的结果。同时，你应该意识到的是，AB相互作用可能不直接引起B表达上升，但会让B通过转运系统集中在AB作用的细胞位点。
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4楼2015-04-24 17:36:54
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