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mofashishe铜虫 (小有名气)
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蛋白相互作用问题 已有1人参与
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最近投稿一文章，陈述的是病原物的A蛋白与寄主的B蛋白相互作用的，在文中我提供了酵母双杂交、BiFC（还有共定位）和免疫共沉淀的数据都表明了这两个蛋白是可以相互作用的，但是评委一定要我补充promoter：GUS的数据证明寄主的B蛋白在病原物的侵染位点表达量提高。 我认为如果这个寄主的B蛋白是一类组织特异性表达蛋白的话则需要提供promoter：GUS的数据，但是文中我已经通过qPCR和WB证明了这个B蛋白是一类组成型蛋白，在所有组织中都有表达的，而且，也引用其他参考文献证明该蛋白是在所有组织中表达的。 我想问问我想问问promoter：gus的数据在证明两个蛋白之间的相互作用有什么意义的，病原物的蛋白与寄主的蛋白互作一定会提高该互作蛋白的表达的吗？有谁遇见过这种问题，怎么破啊？ |
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2楼2015-04-24 16:45:49
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【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★
mofashishe: 金币+5, ★★★很有帮助 2015-04-24 17:40:51
mofashishe: 金币+5, ★★★很有帮助 2015-04-24 17:40:51
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我觉的review的重点是通过相互作用引起B在特定作用位点表达上升，表明B的富集参与生物胁迫，而不是单纯要再证明是否有相互作用发生，这是着眼于相互作用可能带来的生理意义。你用三种方法做相互作用已经很全面了。你的qPCR和WB只是证明B的整体水平上升，无法说明B是否高表达在AB作用部位。 至于AB相互作用是否引起B表达上升，这得看你的结果。同时，你应该意识到的是，AB相互作用可能不直接引起B表达上升，但会让B通过转运系统集中在AB作用的细胞位点。 |
4楼2015-04-24 17:36:54
mofashishe
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非常感谢，你这样说我就明白了，但是评委的原话是这样说的“While the authors showed, using qPCR, that AtCYS is upregulated in response to infection by pathogen in root (Figure 5), there is no direct evidence that the interaction between UsCP and AtCYS takes place in the infection region. The activity of AtCYS promoter should be assayed in the infection region after pathogen parasitizing. ” 我理解为“但是A与B相互作用一定会促进B的表达”没有错吧？ |
5楼2015-04-24 17:49:31
mofashishe
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另外评委一直要我证明“Does the interaction between UsCP and AtCYS take place in the infection region?;” 这需要用什么实验来证明啊？ 我的理解是用类似BiFC的方法在寄主上表达AtCYS-nYFP融合蛋白，在病原上表达UsCP-cYFP融合蛋白，然后让病原物去侵染寄主，在观察有没有荧光产生。 我这样的理解对吗？但问题是我研究的这种病原物目前没有转化的技术，那应该怎么样让病原物表达重组蛋白呢？ 而且目前我还真没看见过有证明病原物的蛋白在寄主的侵染点中与寄主蛋白相互作用的直接证据的，都是使用其他体系来证明两个蛋白相互作用的。 |
6楼2015-04-24 17:55:52
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7楼2015-04-24 17:55:57
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8楼2015-04-24 17:59:45
