24小时热门版块排行榜    

查看: 1855  |  回复: 5

张grape

铁虫 (初入文坛)

[求助] 如何把一个基因的两端连在一起? 已有3人参与

一个基因 分两段扩出来了 但是怎么把这两段连接在一起?
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

甲方不怕乙方

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2015-04-17 10:48:45
首先需要设计克隆这两个基因片段的引物,设计的引物很重要 你需要分别给这两端的引物添加相同的酶切位点 等克隆出来这两个片段之后 各自进行相应的酶切,之后做个连接就好了
我要让你的生活因为有我而更精彩
2楼2015-04-16 19:04:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
设计引物,进行SOE(Gene splicing by over lap extension)PCR。
3楼2015-04-16 20:29:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
这两段有重叠区吗?如果有,用重叠PCR就行。
4楼2015-04-16 21:53:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangjuan211

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 甲方不怕乙方 at 2015-04-16 19:04:19
首先需要设计克隆这两个基因片段的引物,设计的引物很重要 你需要分别给这两端的引物添加相同的酶切位点 等克隆出来这两个片段之后 各自进行相应的酶切,之后做个连接就好了

你好,我想问一下,我是要将cDNA连接成二倍体,怎么也连不上,是粘性末端,是什么原因呢?我用的是promega的T4,4度连接8-10个小时吧...
5楼2015-06-15 20:01:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

甲方不怕乙方

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by wangjuan211 at 2015-06-15 20:01:12
你好,我想问一下,我是要将cDNA连接成二倍体,怎么也连不上,是粘性末端,是什么原因呢?我用的是promega的T4,4度连接8-10个小时吧......

很抱歉,二倍体是什么情况,这个就真的不懂了!

[ 发自小木虫客户端 ]
我要让你的生活因为有我而更精彩
6楼2015-06-15 23:51:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 张grape 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 澳大利亚 Murdoch University 全奖博士招生(3个名额)地质化工冶金领域 +73 AI8RaGaPaSCR 2026-08-07 76/3800 2026-08-14 08:45 by IUa8yhHGR7hP
[基金申请] FileCode能看出啥? +10 要乐观耀哥 2026-08-10 30/1500 2026-08-14 07:55 by 医学老男孩
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +9 majunge000 2026-08-10 12/600 2026-08-13 23:20 by iwuli
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的,真有人买论文么?感觉没必要啊 +9 Tide man 2026-08-10 10/500 2026-08-13 20:33 by 温淼淼淼
[文学芳草园] 阿姨 +4 汪汪锅 2026-08-09 4/200 2026-08-13 19:43 by arzu_hma
[硕博家园] 一作与独作在应聘高校教师时区别大吗 +3 mbygzh 2026-08-08 4/200 2026-08-13 19:31 by 龙-樱
[基金申请] 静等基金结果 +8 gjjjzhong 2026-08-10 21/1050 2026-08-13 17:56 by 且听虎啸
[基金申请] filecode +14 documentary 2026-08-10 16/800 2026-08-13 16:39 by 润生71
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] 结合人工智能,周易传统文化,filecode打分制来了,3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +22 Lanmanbaby 2026-08-09 36/1800 2026-08-12 22:50 by sdfapple719
[基金申请] 好奇怪的filecode +5 布布和一二 2026-08-08 6/300 2026-08-12 16:11 by 云上清扬
[论文投稿] 职称评审,求友友推荐见刊最快的期刊 +4 工厂打螺丝 2026-08-08 4/200 2026-08-12 09:18 by hansi2025
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分? +11 yufeiwaner 2026-08-09 13/650 2026-08-12 08:17 by yufeiwaner
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果? +3 yuleib84 2026-08-11 3/150 2026-08-11 21:53 by jnhyjjm
[基金申请] 什么时候出结果,有咨询渠道??? +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
[基金申请] 确定了,国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
[基金申请] 2026国自然放榜时间 +9 布布和一二 2026-08-08 9/450 2026-08-10 11:22 by xxxx2020
[基金申请] fileCode有新解读? +10 Tide man 2026-08-08 18/900 2026-08-09 12:55 by 仁砚薪传
信息提示
请填处理意见