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1楼2015-04-16 18:44:48

stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

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【答案】应助回帖

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这两段有重叠区吗？如果有，用重叠PCR就行。

4楼2015-04-16 21:53:32

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甲方不怕乙方

木虫 (正式写手)

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kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2015-04-17 10:48:45

首先需要设计克隆这两个基因片段的引物，设计的引物很重要你需要分别给这两端的引物添加相同的酶切位点等克隆出来这两个片段之后各自进行相应的酶切，之后做个连接就好了

我要让你的生活因为有我而更精彩

2楼2015-04-16 19:04:19

lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

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设计引物，进行SOE（Gene splicing by over lap extension）PCR。

3楼2015-04-16 20:29:03

wangjuan211

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引用回帖:

2楼: Originally posted by 甲方不怕乙方 at 2015-04-16 19:04:19
首先需要设计克隆这两个基因片段的引物，设计的引物很重要你需要分别给这两端的引物添加相同的酶切位点等克隆出来这两个片段之后各自进行相应的酶切，之后做个连接就好了

你好，我想问一下，我是要将cDNA连接成二倍体，怎么也连不上，是粘性末端，是什么原因呢？我用的是promega的T4，4度连接8-10个小时吧...

5楼2015-06-15 20:01:12