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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 如何把一个基因的两端连在一起？
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张grape

铁虫 (初入文坛)

[求助] 如何把一个基因的两端连在一起？ 已有3人参与

一个基因 分两段扩出来了 但是怎么把这两段连接在一起？
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1楼 2015-04-16 18:44:48
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甲方不怕乙方

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2015-04-17 10:48:45
首先需要设计克隆这两个基因片段的引物，设计的引物很重要 你需要分别给这两端的引物添加相同的酶切位点 等克隆出来这两个片段之后 各自进行相应的酶切，之后做个连接就好了
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我要让你的生活因为有我而更精彩
2楼2015-04-16 19:04:19
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
设计引物，进行SOE（Gene splicing by over lap extension）PCR。
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3楼2015-04-16 20:29:03
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这两段有重叠区吗？如果有，用重叠PCR就行。
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4楼2015-04-16 21:53:32
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wangjuan211

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 甲方不怕乙方 at 2015-04-16 19:04:19
首先需要设计克隆这两个基因片段的引物，设计的引物很重要 你需要分别给这两端的引物添加相同的酶切位点 等克隆出来这两个片段之后 各自进行相应的酶切，之后做个连接就好了

你好，我想问一下，我是要将cDNA连接成二倍体，怎么也连不上，是粘性末端，是什么原因呢？我用的是promega的T4，4度连接8-10个小时吧...
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5楼2015-06-15 20:01:12
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甲方不怕乙方

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by wangjuan211 at 2015-06-15 20:01:12
你好，我想问一下，我是要将cDNA连接成二倍体，怎么也连不上，是粘性末端，是什么原因呢？我用的是promega的T4，4度连接8-10个小时吧......

很抱歉，二倍体是什么情况，这个就真的不懂了！

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我要让你的生活因为有我而更精彩
6楼2015-06-15 23:51:10
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