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张grape

铁虫 (初入文坛)

[求助] 如何把一个基因的两端连在一起? 已有3人参与

一个基因 分两段扩出来了 但是怎么把这两段连接在一起?
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甲方不怕乙方

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2015-04-17 10:48:45
首先需要设计克隆这两个基因片段的引物,设计的引物很重要 你需要分别给这两端的引物添加相同的酶切位点 等克隆出来这两个片段之后 各自进行相应的酶切,之后做个连接就好了
我要让你的生活因为有我而更精彩
2楼2015-04-16 19:04:19
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
设计引物,进行SOE(Gene splicing by over lap extension)PCR。
3楼2015-04-16 20:29:03
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
这两段有重叠区吗?如果有,用重叠PCR就行。
4楼2015-04-16 21:53:32
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wangjuan211

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 甲方不怕乙方 at 2015-04-16 19:04:19
首先需要设计克隆这两个基因片段的引物,设计的引物很重要 你需要分别给这两端的引物添加相同的酶切位点 等克隆出来这两个片段之后 各自进行相应的酶切,之后做个连接就好了

你好,我想问一下,我是要将cDNA连接成二倍体,怎么也连不上,是粘性末端,是什么原因呢?我用的是promega的T4,4度连接8-10个小时吧...
5楼2015-06-15 20:01:12
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甲方不怕乙方

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by wangjuan211 at 2015-06-15 20:01:12
你好,我想问一下,我是要将cDNA连接成二倍体,怎么也连不上,是粘性末端,是什么原因呢?我用的是promega的T4,4度连接8-10个小时吧......

很抱歉,二倍体是什么情况,这个就真的不懂了!

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我要让你的生活因为有我而更精彩
6楼2015-06-15 23:51:10
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