| 查看: 2890 | 回复: 7 | ||
[求助]
土壤磷酸酶测定问题求助，急急急 已有1人参与
|
|
最近在做土壤磷酸酶，可是标曲做了好几遍都不行，相关性很低，测得的土壤磷酸酶活性数据也是浮动很大，我测得是酸性磷酸酶，显色后是粉红色，但是做的无基质对照和空白对照数据跟样品差不多，说明试验很失败，显色都是红色，包括标曲都没有明显的变化，求做过土壤磷酸酶的大神赐教，万分感谢！一下是我的试验方法 土壤磷酸酶（酸性） （一）试剂 1. pH5醋酸盐缓冲液： A:0.2mol/L 醋酸溶液（11.55ml稀释至1000ml） B:0.2mol/L醋酸钠溶液 A液14.8ml+B液35.2ml稀释至100ml 2. 0.5%磷酸苯二钠：pH5醋酸缓冲液配制，我在这里加了6.75克磷酸苯二钠然后溶于缓冲液 3. 氯代二溴对苯醌亚胺：称取0.125g 2，6-二溴苯醌氯酰亚胺，用10ml 96%乙醇（48ml乙醇+2ml水）溶解，贮存于棕色瓶中，存放在冰箱中，保存的黄色溶液未变褐色之前均可使用。 4. 酚标准溶液：酚原液---取1g苯酚溶于蒸馏水中，定容至1000ml水中，保存于棕色瓶中。酚工作液---取10ml酚原液稀释至1000ml，每毫升含0.01mg酚 5. 甲苯 6. pH9.4硼酸缓冲液：A液：0.05mol/L硼砂 B液：0.2mol/L氢氧化钠 A液50ml+B液11ml 稀释至200ml （二）实验步骤 1. 标线制作 取0，1，3，5，7，9，11，13ml酚工作液，置于50ml比色管中，加入5ml缓冲液（pH9.4硼酸缓冲液）和4滴氯代二溴对苯醌亚胺试剂，显色后稀释至刻度，30min后比色测定于660nm波长下测定吸光度。 2. 样品测定 称取风干土样（过1mm筛，去除杂质）5.00g，放置于三角瓶中，加1ml甲苯，15min后加入20ml 0.5%磷酸苯二钠，仔细摇匀后放置于37°C恒温箱中陪养24h，后培养液中加入50ml蒸馏水离心过滤。吸取滤液3ml于50ml比色管中，按标准曲线方法显色，并测定吸光度。 同时做空白实验和每一土样的无基质对照 （三）数据计算 以24小时每克土壤中释放出酚的毫克数表示 |
回复此楼» 猜你喜欢
有多少人是今天查系统知道结果的？
已经有17人回复
-
为什么资助数各大高校都创新高，自己申请怎么就这么难
已经有3人回复
-
基金未中，这种答复是模板吗？
已经有4人回复
-
导师吐槽：我怎么摊上了这么个极品研究生！
已经有5人回复
-
怎么看青基中了没有啊
已经有5人回复
-
梦想
已经有3人回复
-
面上合作单位盖章
已经有3人回复
-
看板上这么多中的，有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉……
已经有5人回复
-
基金不中，共勉
已经有7人回复
-
为什么 国际(地区)合作与交流项目 没有放榜？
已经有11人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 求助土壤酸性磷酸酶活性测定的详细方法~~~
已经有17人回复
- 超氧化物歧化酶的测定
已经有4人回复
- 关于土壤中过氧化氢酶活性的测定
已经有15人回复
- 6磷酸葡萄糖脱氢酶可以用磷酸缓冲液吗？
已经有14人回复
- 酶活测定中的缓冲液
已经有4人回复
- 土壤磷酸酶活性测定遇到问题急需求解？？
已经有24人回复
- 土壤采样如何确定选取土壤地的典型性？谢谢 ！
已经有4人回复
- 过氧化物酶测定为什么不显色呢，我用的是愈创木酚法
已经有15人回复
- 测定土壤酸性磷酸酶不显色，求各位高人指点一二
已经有4人回复
- 在线急求关于土壤全磷测定方法
已经有6人回复
- 关于六价铬测定显色问题
已经有10人回复
- 求助土壤有机氮组分测定方法及经验
已经有14人回复
- 我想测土壤磷酸酶。不过里面有个试剂叫：氯代二溴对苯醌亚胺、太贵了。怎么办？
已经有4人回复
- 测定胃蛋白酶活力时候的问题
已经有10人回复
- 【求助/交流】关于SOD活性测定中加甲硫氨酸
已经有8人回复
- 【求助】求助关于土壤蛋白酶和蔗糖酶测定所遇到的问题
已经有14人回复
- 【求助】土壤酸性磷酸酶
已经有13人回复
- Western Blot 磷酸化蛋白测定问题
已经有9人回复
2楼2016-03-23 13:33:10
虫之鼻祖
铜虫 (正式写手)
- 应助: 12 (小学生)
- 金币: 1904.8
- 散金: 621
- 红花: 6
- 帖子: 408
- 在线: 230.3小时
- 虫号: 3159500
- 注册: 2014-04-24
- 性别: GG
- 专业: 作物栽培与耕作学
3楼2016-03-25 15:27:47
4楼2016-12-30 19:45:24
5楼2017-01-03 09:38:40
6楼2017-01-03 20:08:06
君临天下2605
铁虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 61.3
- 散金: 10
- 帖子: 19
- 在线: 6.4小时
- 虫号: 2607064
- 注册: 2013-08-20
- 性别: MM
- 专业: 生理生态学
7楼2017-03-03 13:17:48
|
请问一下，用这个方法做磷酸酶时，无基质对照是加20毫升的水吗？还是还要加相应的缓冲液？水和缓冲液的量分别加多少？近期做磷酸酶，但就是在这个问题上卡住了 发自小木虫Android客户端 |
8楼2017-08-19 10:48:33
