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土壤磷酸酶测定问题求助，急急急 已有1人参与
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最近在做土壤磷酸酶，可是标曲做了好几遍都不行，相关性很低，测得的土壤磷酸酶活性数据也是浮动很大，我测得是酸性磷酸酶，显色后是粉红色，但是做的无基质对照和空白对照数据跟样品差不多，说明试验很失败，显色都是红色，包括标曲都没有明显的变化，求做过土壤磷酸酶的大神赐教，万分感谢！一下是我的试验方法 土壤磷酸酶（酸性） （一）试剂 1. pH5醋酸盐缓冲液： A:0.2mol/L 醋酸溶液（11.55ml稀释至1000ml） B:0.2mol/L醋酸钠溶液 A液14.8ml+B液35.2ml稀释至100ml 2. 0.5%磷酸苯二钠：pH5醋酸缓冲液配制，我在这里加了6.75克磷酸苯二钠然后溶于缓冲液 3. 氯代二溴对苯醌亚胺：称取0.125g 2，6-二溴苯醌氯酰亚胺，用10ml 96%乙醇（48ml乙醇+2ml水）溶解，贮存于棕色瓶中，存放在冰箱中，保存的黄色溶液未变褐色之前均可使用。 4. 酚标准溶液：酚原液---取1g苯酚溶于蒸馏水中，定容至1000ml水中，保存于棕色瓶中。酚工作液---取10ml酚原液稀释至1000ml，每毫升含0.01mg酚 5. 甲苯 6. pH9.4硼酸缓冲液：A液：0.05mol/L硼砂 B液：0.2mol/L氢氧化钠 A液50ml+B液11ml 稀释至200ml （二）实验步骤 1. 标线制作 取0，1，3，5，7，9，11，13ml酚工作液，置于50ml比色管中，加入5ml缓冲液（pH9.4硼酸缓冲液）和4滴氯代二溴对苯醌亚胺试剂，显色后稀释至刻度，30min后比色测定于660nm波长下测定吸光度。 2. 样品测定 称取风干土样（过1mm筛，去除杂质）5.00g，放置于三角瓶中，加1ml甲苯，15min后加入20ml 0.5%磷酸苯二钠，仔细摇匀后放置于37°C恒温箱中陪养24h，后培养液中加入50ml蒸馏水离心过滤。吸取滤液3ml于50ml比色管中，按标准曲线方法显色，并测定吸光度。 同时做空白实验和每一土样的无基质对照 （三）数据计算 以24小时每克土壤中释放出酚的毫克数表示 |
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请问一下，用这个方法做磷酸酶时，无基质对照是加20毫升的水吗？还是还要加相应的缓冲液？水和缓冲液的量分别加多少？近期做磷酸酶，但就是在这个问题上卡住了 发自小木虫Android客户端 |
8楼2017-08-19 10:48:33
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虫之鼻祖
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