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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 干扰/敲除 » 转pKD46时转不进去
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浅语8905

新虫 (小有名气)

[求助] 转pKD46时转不进去 已有4人参与

转pKD46时，氯化钙和电转法都试过了，可是还是没有转进去，不知道原因？感受态转别的质粒倒是没有问题，pKD46也可以转入别的菌中！
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1楼 2015-01-29 14:56:17
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

张凡云

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2015-02-02 10:55:19
你是用Red系统做敲除吧，要看你用的菌是什么菌，我也在做这个，目前做到了用pcp20消除FRT位点了，可以一起讨论一下。
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4楼2015-01-31 02:23:39
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普通回帖

maila
2楼2015-01-30 08:21:44
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浅语8905

新虫 (小有名气)
3楼2015-01-30 11:03:30
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浅语8905

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 张凡云 at 2015-01-31 02:23:39
你是用Red系统做敲除吧，要看你用的菌是什么菌，我也在做这个，目前做到了用pcp20消除FRT位点了，可以一起讨论一下。

我是转进去PKD46了，但是现在是长一段时间，菌就死了，不知道怎么解决呢，只能先不断活化了
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5楼2015-02-01 20:39:10
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twinacmilan

木虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
浅语8905: 金币+1, ★有帮助 2015-02-03 08:45:57
转进去pKD46注意保证培养温度低于30度，因为质粒是温敏型，高温容易造成质粒丢失
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6楼2015-02-02 21:17:36
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浅语8905

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by twinacmilan at 2015-02-02 21:17:36
转进去pKD46注意保证培养温度低于30度，因为质粒是温敏型，高温容易造成质粒丢失

这些都是按照步骤来的，应该是菌株自身的问题，转PKD46时自己提取的质粒怎么都转不进去，买了的产品才转进去，就觉得好奇怪
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7楼2015-02-03 08:44:57
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twinacmilan

木虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 浅语8905 at 2015-02-03 08:44:57
这些都是按照步骤来的，应该是菌株自身的问题，转PKD46时自己提取的质粒怎么都转不进去，买了的产品才转进去，就觉得好奇怪...

和买不买的质粒没啥关系吧，估计你手提的质粒已经不是pkd46了
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8楼2015-02-04 15:46:02
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浅语8905

新虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by twinacmilan at 2015-02-04 15:46:02
和买不买的质粒没啥关系吧，估计你手提的质粒已经不是pkd46了...

应该不是这个问题，就是买回来的质导入DH5a中，在提取出来的质粒转入我的菌中，就是转不进去，也是酶切验证过的，质粒是对的
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9楼2015-02-04 16:16:06
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一砖头飘死

银虫 (小有名气)
陈娟，不是已经敲掉了嘛！

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10楼2015-02-07 17:15:20
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