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476210038

新虫 (初入文坛)

[求助] 液相色谱高浓度时为单峰,低浓度时出现两个峰 已有10人参与

液相色谱高浓度时为单峰,低浓度时出现两个峰,且两个峰没有达到基线分离,怎么办? 试了中间浓度,峰形为一个大峰的右翼上出现一个小峰。怎么办呢,新手求助。
等度洗脱水(0.05%甲酸):乙腈=35:65,样品用乙腈溶的,样品易溶于有机相,水中溶解性差
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谈判陶

荣誉版主 (文坛精英)

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【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
费姚永芬: 金币+2, 感谢交流,欢迎常来分析版 2015-01-31 08:33:03
说明至少为两个峰
高浓度时重合一起了

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挑灯看人间!
2楼2015-01-28 21:46:12
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superyeast

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
archbishop: 金币+3, 感谢参与。 2015-01-29 12:06:37
引用回帖:
3楼: Originally posted by 476210038 at 2015-01-28 01:50:58
样品刚买不久 纯度应该没有问题

你的样品有酸/碱基团吗?你用的FA量很小,难以控制pH一般应该在水和有机相里都加0.1%FA。还有溶样应该尽量用初始流动相。

新买的样品和纯度没有关系,甚至新买的可能更差,因为以前没人证明过它是纯的。打个核磁验证一下比较好。

[ 发自小木虫客户端 ]
4楼2015-01-28 22:27:22
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w9412

新虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 476210038 at 2015-01-28 23:49:51
刚刚连了质谱做了全扫描,发现两个峰所处的时间段质谱显示为同一分子量的物质,怀疑是不是同分异构体?浓度低时的两个没分开的峰,质谱上显示在两者的交叉处,就是峰谷处,质谱响应是最高的,而两侧相对低一些...

如果你不是用的手性柱的话一般不会把同分异构体分离开的
液相,分析纯化,多肽蛋白
24楼2015-02-02 12:25:06
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songzi136

金虫 (正式写手)

用你的流动相溶一下试试
25楼2015-02-02 13:08:53
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普通回帖

476210038

新虫 (初入文坛)

样品刚买不久 纯度应该没有问题
3楼2015-01-28 21:50:58
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476210038

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by superyeast at 2015-01-28 22:27:22
你的样品有酸/碱基团吗?你用的FA量很小,难以控制pH一般应该在水和有机相里都加0.1%FA。还有溶样应该尽量用初始流动相。

新买的样品和纯度没有关系,甚至新买的可能更差,因为以前没人证明过它是纯的。打个核磁 ...

刚刚连了质谱做了全扫描,发现两个峰所处的时间段质谱显示为同一分子量的物质,怀疑是不是同分异构体?浓度低时的两个没分开的峰,质谱上显示在两者的交叉处,就是峰谷处,质谱响应是最高的,而两侧相对低一些
5楼2015-01-28 23:49:51
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476210038

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 476210038 at 2015-01-28 23:49:51
刚刚连了质谱做了全扫描,发现两个峰所处的时间段质谱显示为同一分子量的物质,怀疑是不是同分异构体?浓度低时的两个没分开的峰,质谱上显示在两者的交叉处,就是峰谷处,质谱响应是最高的,而两侧相对低一些...

还有就是,低浓度样品我改变洗脱条件后(水:乙腈=40:60),低浓度的峰也二合一了,就是峰形感觉不是十分对称,另外溶剂峰峰高和样品峰峰高差不多,不知道这样的液相条件能用吗
6楼2015-01-28 23:53:14
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longyi706565

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
archbishop: 金币+3, 感谢参与。 2015-01-29 12:06:31
信息太少。最好给张图,方便给个结构看看。
这种情况可能性较多,其中有一种可能你的pH选择不对或者溶剂效应啥的,其实就是一个物质。
7楼2015-01-29 10:50:49
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ndchem

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
archbishop: 金币+3, 感谢参与。 2015-01-29 12:06:26
476210038: 金币+2, 有帮助 2015-02-02 09:50:32
再强调一次,hplc不是出1个峰就是纯物质,不是出两个峰就不是纯物质,99%的东西出20个峰都见过,hplc只能用做参比,不能定性

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8楼2015-01-29 10:57:53
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秀古书生

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
archbishop: 金币+3, 感谢参与。 2015-01-29 12:06:13
最好把你的谱图传上来让大家分析一下,同一个描述图谱很多情况不一定相同,确定下到底是物质本身的原因还是条件的原因,还是图谱的原因。
9楼2015-01-29 11:37:37
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虫儿飞飞呦

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
上图比较直观,是不是同分异构或结构相近的物质没有完全分离,试一下其他的浓度流动相洗脱

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10楼2015-01-29 12:57:03
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