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静待天享

金虫 (小有名气)

[求助] ELISA相关问题 已有2人参与

做ELISA实验过程中，标准品的吸光值没有趋势，不知道问题出现在哪里？
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1楼 2015-01-27 15:54:28
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飞约疯人院

专家顾问 (著名写手)

科学怪人

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2015-01-27 21:43:31
转自{bjwjs2}
比色要注意波长的选择。以TMB为底物和以OPD为底物的试剂盒均有使用，而前者比色波长为450nm，后者为492nm，滤光片需根据要求随时更换。因此，容易出现滤光片错用的问题。   其次，单波长或双波长比色选择的问题。所谓的单波长比色即是通常的以对显色具有最大吸收的波长如450nm或492nm进行比色测定；而双波长双色则酶标仪在敏感波长如450nm和非敏感波长如630nm下各测定一次，敏感波上下的吸光度测定值为样本测定酶反应特异显色的吸光度与板孔上指纹、刮痕、灰尘等脏物所致的吸光度之和；非敏感波长下测定即改变波长至一定值，使得样本测定酶反应特异显色的吸光度值为零，此时测得的吸光度即为脏物的吸光度值。最后酶标仪给出的数值为敏感波长下的吸光度值与非常感波长下的吸光度值的差。因此，双波长比色测定具有能排除由微滴板本身、板孔内标本的非特异吸收、指纹、刮痕、灰尘等对特异显色测定吸光度的影响的优点。由于ELISA测定中单个空白孔的非特异吸收上有一定程度的不确定性，也就是说每次测定或同次测定空白孔位置的不同均有可能得到不同吸光度测定值，故而在ELISA测定比色时，最好是使用双波长比色。
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人生贵在行动，迟疑不决时，不妨先迈出小小一步。
2楼2015-01-27 20:46:59
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hbl215

金虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
是指没有梯度吗？可能二抗浓度过高或孵育时间过长，导致背景太高而掩盖了梯度。分享一下你做的过程，这样大家更好分析。

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3楼2015-01-27 23:19:59
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