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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 说我遇到了罕见事件，大家帮我分析分析
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msw0103

金虫 (正式写手)

[求助] 说我遇到了罕见事件，大家帮我分析分析 已有2人参与

我克隆一个片段连接到pMD-20T载体，用通用引物测序，结果正确。然后我双酶切这个片段连入到表达载体上，用表达载体上的测序引物进行测序，结果也正确，峰图很干净。再之后我用我扩增该片的引物进行测序，竟然在序列中部有连续7个碱基出现双峰，也就是所谓的疑似突变。测序片段仅400bp，为什么会这样呢？测序公司说我遇到了罕见事件，菌发生了突变，让我重新纯化送测序。我如果不进行第三次测序，我就不可能发现这个问题，那我就当成正确的往下做了。我很疑惑！大家有遇到过这样的问题吗？
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1楼 2015-01-26 11:21:57
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zshw_001

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
有可能是测序的菌保存不当吧，实验室可以让菌突变的东西太多了。
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永远相信未知的总是美好的！
5楼2015-01-26 17:21:50
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红卫大兵

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
是不是会是你引物扩增时出现的突变？
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2楼2015-01-26 13:29:31
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msw0103

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 红卫大兵 at 2015-01-26 13:29:31
是不是会是你引物扩增时出现的突变？

我引物扩增的片段克隆岛pMD-20T载体，测序是正确的呀？而且用的高保真酶，扩这么短的片段。
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3楼2015-01-26 13:41:42
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msw0103

金虫 (正式写手)
都没有人遇到过吗？难道真是小概率事件被我撞见？
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4楼2015-01-26 13:43:16
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