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[求助]
求助等点聚焦测等电点，和毛细管电泳测等电点。
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1、 仪器及缓冲液：我在军事医学科学院用等电聚焦的方法，测定蛋白质的等电点。实验时用的是Bio-Rad的等电聚焦电泳仪。胶和上样缓冲液也只Bio-Rad的产品（预制胶适合分子量为10-100kDa，等电点在3-10之间的蛋白；上样缓冲液中含有0.48g/ml的尿素）。 2、 蛋白情况：我的蛋白是从芒果中纯化的酸性蔗糖转化酶，其他不同植物的这种酶等电点大概在5左右。我做SDS-PAGE蛋白的分子量大概在50 kDa左右，Ntive-PAGE蛋白的位置在145kda(只是大概，非变性电泳不能准确测定分子量)。 3、 实验情况：实验进行的很正常，电泳过程中电压都正常，但是就是跑不出条带，一开始觉得是蛋白的浓度低，后来又增大了上样量和蛋白的浓度也都做不出来(上样量最多的时候蛋白的量达到了SDS-PAGE的50倍以上 )。目前怀疑是较高的尿素引起了蛋白的聚集，导致蛋白没有进入胶里面；也可能是胶的浓度太高蛋白进不去。那边老师说他们做了很多都没有问题，唯独我这一个。 各位大神帮我分析下原因，有知道北京哪里可以作毛细管电泳吗？我想用毛细管电泳测等电点。谢谢  正常SDS-PAGE.jpg |
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