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渡河人木虫 (著名写手)
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采用3，5-二硝基水杨酸（DNS）法测定α-淀粉酶活性问题请教
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各位专家、老师、同学大家好： 我现在实验有一部分需要用采用3，5-二硝基水杨酸（DNS）法测定α-淀粉酶活性，查阅期刊文献得到的方法如下(最终决定方案，估计不会修改了)： 1：α-淀粉酶提取：取种子40粒，消毒，冲洗，浸泡6h后，在23℃的生化培养箱中萌发3d，称取1g （去除芽和根），研磨匀浆，用蒸馏水提取定容10ml，室温下放置1h后4℃下12000r/min离心10min，上清液即为淀粉酶提取液。 2： 制作标准曲线：取7支25ml试管，分别加入0，0.2，0.6，1，1.4，1.8，2ml麦芽糖标准液1mg/ml，用蒸馏水补至2ml，加入DNS试剂2ml，沸水中煮沸5min，冷却后用蒸馏水定容至25ml，在540nm（或520nm）处测其光密度值，绘制标准曲线。 3：样品测定：取待测液1ml，置于70℃水浴中15min，冷却后放入40℃水浴中10min，加入1%淀粉1ml，准确保温5min，加入DNS试剂2ml，其他同上，每个样品重复3次。 4：α-淀粉酶活性的计算公式为： α-淀粉酶活性（mg/g.min）=[浓度（mg/ml）×体积（ml）×稀释倍数]/样品鲜重（g）×时间（min）。 现在想咨询的是公式各部分代表的含义：各位老师看看我的对不对？ 浓度：是根据样品测定的吸光度对应标准曲线的麦芽糖的浓度？ 体积：取代测液1ml的1ml 稀释倍数：取代测液1ml最后定容25ml，故25倍 样品鲜重：称取1g， 时间：样品测定时，候加入加入1%淀粉1ml后，准确保温5min 中的的5min？ 请问是不是这个样子？ 谢谢您的回复 感谢 |
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