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未成年的甘甘

新虫 (初入文坛)

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[求助] 有木有关于细胞培养的文献，细胞培养主要分为哪几个期，每个期都有什么特点。已有1人参与

有木有关于细胞培养的文献，细胞培养主要分为哪几个期，每个期都有什么特点。

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1楼 2014-12-19 08:41:10

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Beryl_xu

铁虫 (小有名气)

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【答案】应助回帖

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复苏
1. 从液氮中取出冻存的细胞，立即放到37℃的水浴锅，轻微摇动。液体都融化后（大概1-1.5分钟），取出喷点酒精置于超净工作台里。
2. 将细胞悬液吸到装有10ml 培养基的15ml 离心管中（用培养基将粘在管壁上的细胞洗下来），1000转离心5分钟，把上清液倒掉，加1ml培养基把细胞悬浮起来。吸到装有10ml培养基的10cm培养皿中前后左右轻轻摇动，使培养皿中的细胞均匀分布。4. 标好细胞种类和日期、培养人名字等，放到CO2培养箱中培养，细胞贴壁后换培养基。5. 3天换一次培养基。二、传代1. 培养皿中的细胞覆盖率达到80%-90%时要传代。2. 把原有培养基吸掉。3. 加适当的胰蛋白酶（能覆盖细胞就行），消化1-2分钟。4. 细胞都变圆后加如入等体积的含血清的培养基终止消化。5. 用移液枪吹打细胞，把细胞都悬浮起来。6. 把细胞吸到15ml的离心管中，1000转离心5分钟。7. 倒掉上清液，加1-2ml培养基，把细胞都吹起来。8. 根据细胞种类把细胞传到几个培养皿中。一般，癌细胞分5个，正常细胞传3个。继续培养。三、冻存把细胞消化下来并离心（同上）。用配好的冻存液把细胞悬浮起来，分装到灭菌的冻存管中，静止几分钟，写明细胞种类，冻存日期。4℃ 30min，-20℃ 30min，-80℃过夜，然后放到液氮灌中保存。冻存液的配制： 70%的完全培养基+20%FBS+10%DMSO. DMSO要慢慢滴加，边滴边摇。要注意的就是无菌操作！