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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 关于“CHO 细胞培养过程中乳酸的生成”问题
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新虫 (初入文坛)

[求助] 关于“CHO 细胞培养过程中乳酸的生成”问题

在CHO细胞培养过程中，一般在对数生长期乳酸快速累积，进入稳定期后其浓度基本不再增加，而我们所做结果是后期乳酸依然在增加，而且增加的不少，除了我想到的培养中后期适当增加搅拌速度与降低葡萄糖的维持水平，改变接种密度，还有什么办法可以做到稳定期乳酸浓度不在增加的效果。

另如何能做到将乳酸作为中间产物进行代谢这一理想状态
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1楼 2013-06-20 10:02:28
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wolfman840

木虫 (正式写手)

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★ ★
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随时领金币: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-06-21 10:56:53
根据我的工作经验，一般在稳定期乳酸代谢可以通过流加营养物质和加大通气量的方式来维持平衡。保持细胞密度在一定范围内，不要过高，产乳酸的量就稳定了。
至于第二个问题，我想可能需要对细胞代谢途径进行优化才可以解决。目前我们公司使用的CHO细胞，产的乳酸还不能作为中间产物进行代谢。因为我们流加营养物质了，没有构建营养缺陷型的细胞株。实际生产中也不需要这样的细胞株，因为产物量会低。
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2楼2013-06-20 10:08:43
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新虫 (初入文坛)
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2楼: Originally posted by wolfman840 at 2013-06-20 10:08:43
根据我的工作经验，一般在稳定期乳酸代谢可以通过流加营养物质和加大通气量的方式来维持平衡。保持细胞密度在一定范围内，不要过高，产乳酸的量就稳定了。
至于第二个问题，我想可能需要对细胞代谢途径进行优化才可 ...

您指的稳定期流加营养物质，这个营养物质是利于细胞表达的营养物质还是利于细胞生长的营养物质？

至于乳酸被代谢一说，同一个细胞株在不同批次生产时发现起其中一批乳酸在中后期被利用了，而且该批的表达量很高，所以就想应该培养工艺是可以影响乳酸积累和代谢的，就是不知道到底问题应该怎么去解决
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3楼2013-06-20 11:02:02
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wolfman840

木虫 (正式写手)

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★ ★
随时领金币: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-06-21 10:56:39
流加的是适于表达的营养物质。如果流加的是细胞生长的培养基，那么表达量不能达到要求。在获得一定量的细胞后，就开始流加营养物质，带走代谢产物了。细胞生长的培养基是分两批加入的，不流加。
你说的这个现象，是不是可以理解为你的细胞在培养中后期，由于乳酸的积累和营养物质的缺乏，逐渐适应环境，利用乳酸来进行代谢，表达产物。如果是这样的话，你的产物表达路线中，乳酸可能是另一条途径，可以适当研究一下乳酸浓度和表达量的关系，说不定可以优化培养工艺。
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4楼2013-06-20 11:20:05
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新虫 (初入文坛)
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4楼: Originally posted by wolfman840 at 2013-06-20 11:20:05
流加的是适于表达的营养物质。如果流加的是细胞生长的培养基，那么表达量不能达到要求。在获得一定量的细胞后，就开始流加营养物质，带走代谢产物了。细胞生长的培养基是分两批加入的，不流加。
你说的这个现象，是 ...

明白了，谢谢。

另外想问一下您所说的“细胞生长的培养基是分两批添加”，那两次补加的时机和补加量按什么标准定？
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5楼2013-06-20 12:03:45
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新虫 (初入文坛)
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5楼: Originally posted by 随时领金币 at 2013-06-20 12:03:45
明白了，谢谢。

另外想问一下您所说的“细胞生长的培养基是分两批添加”，那两次补加的时机和补加量按什么标准定？...

明白了谢谢您
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6楼2013-06-20 14:31:44
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新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 随时领金币 at 2013-06-20 12:03:45
明白了，谢谢。

另外想问一下您所说的“细胞生长的培养基是分两批添加”，那两次补加的时机和补加量按什么标准定？...

明白了谢谢您
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7楼2013-06-20 14:32:08
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wolfman840

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
随时领金币: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-06-21 10:56:17
分两批添加的时机是根据细胞生产曲线，在进入稳定期后添加，添加的量以细胞密度为标准，即稀释到对数期细胞密度以下。举个例子来说吧，CHO细胞的对数期细胞密度为2~4×10的6次，那么，我在10×10的6次时添加第一次，稀释到这个值，让他长到10×10的6次，再加培养基稀释。这样，可以获得始终处于对数期的细胞。当然，具体的添加时机和添加量还是需要通过实验来确定的。
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8楼2013-06-20 16:01:12
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