24小时热门版块排行榜    

查看: 3632  |  回复: 6

张冰宝

新虫 (小有名气)

[求助] 包涵体蛋白的柱上复性方法 已有2人参与

有没有大侠做过包涵体蛋白的复性的?都用的什么方法。最近一直在做包涵体蛋白的复性,选择了透析复性,结果复性后除了蛋白浓度降低以外,活性几乎没有任何的改变?听说柱上复性复性率高,查了很多资料但是具体不知道怎么做,还请大侠们指点一下。做了一个多月了始终没有进展,万分火急,请大家多多帮忙,谢谢
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xissy

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

1.你说的活性指的是测蛋白的酶活吗?如果最后透析到不含尿素或者盐酸胍的buffer里,没有酶活的话,可能蛋白还是没有折叠正确。
2.柱上复性和透析复性很像。就是再柱上改变尿素的梯度,8M-6M-4M-3M-2M-1M-0.5M-0。最后能成功洗下来的蛋白就是复性成功的蛋白。
2楼2015-01-14 15:09:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

张冰宝

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by xissy at 2015-01-14 15:09:48
1.你说的活性指的是测蛋白的酶活吗?如果最后透析到不含尿素或者盐酸胍的buffer里,没有酶活的话,可能蛋白还是没有折叠正确。
2.柱上复性和透析复性很像。就是再柱上改变尿素的梯度,8M-6M-4M-3M-2M-1M-0.5M-0。最 ...

感谢您的帮助。我想问一下那复性的柱子是什么柱子啊?是蛋白纯化的柱子吗。因为我没用过,不大清楚。还有就是在柱上换尿素的浓度是不需要离心什么的对吗?
3楼2015-01-15 10:40:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xissy

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 张冰宝 at 2015-01-15 10:40:42
感谢您的帮助。我想问一下那复性的柱子是什么柱子啊?是蛋白纯化的柱子吗。因为我没用过,不大清楚。还有就是在柱上换尿素的浓度是不需要离心什么的对吗?...

就是纯化的柱子。柱上换尿素离心?不懂你的意思。例如倒几个柱体积的8M尿素-再几个柱体积的6M尿素,依次下降。但是这个速度要控制好,不能太快了,不然复性速度太快成功率也会下降的。所以如果有纯化仪的话,用机器控制是最好了的。
4楼2015-01-15 10:49:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

张冰宝

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by xissy at 2015-01-15 10:49:03
就是纯化的柱子。柱上换尿素离心?不懂你的意思。例如倒几个柱体积的8M尿素-再几个柱体积的6M尿素,依次下降。但是这个速度要控制好,不能太快了,不然复性速度太快成功率也会下降的。所以如果有纯化仪的话,用机器 ...

o 我明白了这个就是说我把我纯化的蛋白加入柱子里,然后依次的加不同浓度的尿素溶液。有几个问题想在请教一下
1.加入不同浓度的尿素溶液是直接倒入柱子里吗?还是说是少量多次的加?
2.滤掉的尿素溶液是否直接倒掉?然后开始换下一浓度的尿素溶液?
3.最后的我的蛋白是怎么收集的呢?收集的时候需要注意什么?
4.复性对于蛋白的浓度有没有要求?
非常感谢你的帮助,因为没什么经验所以要问的详细一些。如果您有复性的具体步骤什么的就更好了。非常感谢
5楼2015-01-15 13:46:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

哈哈善哉善哉

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 张冰宝 at 2015-01-15 13:46:53
o 我明白了这个就是说我把我纯化的蛋白加入柱子里,然后依次的加不同浓度的尿素溶液。有几个问题想在请教一下
1.加入不同浓度的尿素溶液是直接倒入柱子里吗?还是说是少量多次的加?
2.滤掉的尿素溶液是否直接倒 ...

您好,我最近也需要做柱上复性的有关内容,请问您这些问题得到解答了么,感谢!!
6楼2015-04-20 17:50:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mlbiosci

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

不敢做,把柱子弄坏了

[ 发自小木虫客户端 ]
7楼2015-04-20 18:15:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 张冰宝 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 321求调剂 +6 Ymlll 2026-03-24 6/300 2026-03-26 20:50 by 不吃魚的貓
[考研] 一志愿211 初试270分 求调剂 +6 谷雨上岸 2026-03-23 7/350 2026-03-26 18:55 by 不吃魚的貓
[考研] 085602化学工程求调剂。 +4 平乐乐乐 2026-03-26 4/200 2026-03-26 17:57 by fmesaito
[考研] 调剂推荐 +4 清酒714 2026-03-26 5/250 2026-03-26 17:49 by fmesaito
[考研] 297求调剂 +6 田洪有 2026-03-26 6/300 2026-03-26 15:55 by 不吃魚的貓
[考研] 303求调剂 +6 蓝山月 2026-03-25 6/300 2026-03-25 22:47 by 418490947
[考研] 机械学硕总分317求调剂!!!! +4 Acaciad 2026-03-25 4/200 2026-03-25 19:59 by hanserlol
[考研] 290分调剂求助 +3 吉祥止止陈 2026-03-25 3/150 2026-03-25 19:58 by barlinike
[考研] 考研一志愿苏州大学初始315(英一)求调剂 +3 sbdksD 2026-03-24 4/200 2026-03-25 18:16 by xcjcqu
[考研] 359求调剂 +3 王了个楠 2026-03-25 3/150 2026-03-25 12:50 by Dyhoer
[考研] 一志愿南航材料专317分求调剂 +5 炸呀炸呀炸薯条 2026-03-23 5/250 2026-03-24 16:52 by 星空星月
[考研] 求调剂 +7 十三加油 2026-03-21 7/350 2026-03-23 23:48 by 热情沙漠
[考研] 341求调剂(一志愿湖南大学070300) +5 番茄头--- 2026-03-22 6/300 2026-03-23 23:45 by Txy@872106
[考研] 一志愿国科过程所081700,274求调剂 +3 三水研0水立方 2026-03-23 3/150 2026-03-23 23:11 by MajorWen
[论文投稿] 急发核心期刊论文 +3 贤达问津 2026-03-23 5/250 2026-03-23 17:13 by 妹子不好惹
[考研] 材料求调剂 +5 @taotao 2026-03-21 5/250 2026-03-21 20:55 by lbsjt
[考研] 材料与化工(0856)304求B区调剂 +3 邱gl 2026-03-20 7/350 2026-03-21 19:05 by 15709483992
[考研] 求调剂 +3 .m.. 2026-03-21 4/200 2026-03-21 16:25 by barlinike
[考研] 南昌大学材料专硕311分求调剂 +6 77chaselx 2026-03-20 6/300 2026-03-21 07:24 by JourneyLucky
[考研] 353求调剂 +3 拉钩不许变 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:56 by JourneyLucky
信息提示
请填处理意见