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汕头大学海洋科学接受调剂
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csbcook

木虫 (小有名气)

[求助] 明胶与考马斯亮蓝的染色问题 已有4人参与

我将0.03g明胶溶到蒸馏水里,完全溶解后,取1ml与5ml考马斯亮蓝溶液反应,20min后用紫外分光光度计595nm检测吸光度,发现完全没有吸收,请教各位到底是什么原因?谢啦
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99503102

版主 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by csbcook at 2014-12-01 16:48:28
1ml明胶的浓度是1.5mg/ml,用的也是G250,感觉浓度不算低吧,没有吸光度啊就是。还想请教一下,如果将明胶用盐酸水解,那么水解产生的氨基酸还能用考马斯亮蓝检测吗?谢谢...

你可以加大浓度试试,多做个实验嘛,也不难,看是不是这个原因。酸水解后的明胶,如果用考马斯亮兰法测,那么测定结果还是蛋白质的残留量,绝不是氨基酸的。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
微信公众号:食安小屋
4楼2014-12-01 18:14:56
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是水货

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
浓度你配10mg/L,就没问题。
5楼2014-12-01 18:38:13
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煜,莫烦恼

木虫 (著名写手)

虫蛹

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
pH 有没有问题;双缩尿,考马斯,BCA显色前提应该都是碱性环境。
努力努力,奋斗奋斗!
11楼2014-12-02 09:39:59
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小毛孩24

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
明胶用酸也会水解的。
测蛋白考马斯亮蓝不是全都适用的,可以试试凯氏定氮,蛋白都可以
12楼2014-12-02 13:32:17
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小毛孩24

专家顾问 (职业作家)

引用回帖:
13楼: Originally posted by csbcook at 2014-12-02 13:51:17
谢谢支持,请问一下6M的盐酸,120°下反应2.5h,明胶能保持不水解不?...

没有做过,我个人感觉会水解
14楼2014-12-02 15:12:07
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是水货

木虫 (著名写手)

引用回帖:
8楼: Originally posted by csbcook at 2014-12-02 08:56:21
谢谢你的大力帮助,我现在面临一个问题希望能请教一下,我们做了一种材料,用明胶和它发生交联反应,现在要测这种材料上连接了多少的明胶,还不能用测剩余凝胶的量来确定。现在不知道怎么办了。那个材料用6M的盐酸 ...

你做的是什么材料?膜?在测明胶羟脯氨酸含量的时候高温水解,你这样做明胶完全水解了。
15楼2014-12-02 18:07:55
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普通回帖

99503102

版主 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
csbcook: 金币+20, 有帮助 2014-12-02 17:33:18
考马斯亮兰有G250和R250两种,测蛋白含量用的是G250,这个不能搞混了。如果用的是G250,会不会是你的明胶浓度太低(1ml明胶浓度没标明),检测不出呢?

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
微信公众号:食安小屋
2楼2014-12-01 15:22:28
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csbcook

木虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 99503102 at 2014-12-01 15:22:28
考马斯亮兰有G250和R250两种,测蛋白含量用的是G250,这个不能搞混了。如果用的是G250,会不会是你的明胶浓度太低(1ml明胶浓度没标明),检测不出呢?

1ml明胶的浓度是1.5mg/ml,用的也是G250,感觉浓度不算低吧,没有吸光度啊就是。还想请教一下,如果将明胶用盐酸水解,那么水解产生的氨基酸还能用考马斯亮蓝检测吗?谢谢
3楼2014-12-01 16:48:28
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是水货

木虫 (著名写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 是水货 at 2014-12-01 18:38:13
浓度你配10mg/L,就没问题。

写错了,是10mg/mL
6楼2014-12-01 19:40:38
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csbcook

木虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 99503102 at 2014-12-01 18:14:56
你可以加大浓度试试,多做个实验嘛,也不难,看是不是这个原因。酸水解后的明胶,如果用考马斯亮兰法测,那么测定结果还是蛋白质的残留量,绝不是氨基酸的。
...

谢谢你的大力帮助,我现在面临一个问题希望能请教一下,我们做了一种材料,用明胶和它发生交联反应,现在要测这种材料上连接了多少的明胶,还不能用测剩余凝胶的量来确定。现在不知道怎么办了。
7楼2014-12-02 08:53:02
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csbcook

木虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 是水货 at 2014-12-01 18:38:13
浓度你配10mg/L,就没问题。

谢谢你的大力帮助,我现在面临一个问题希望能请教一下,我们做了一种材料,用明胶和它发生交联反应,现在要测这种材料上连接了多少的明胶,还不能用测剩余凝胶的量来确定。现在不知道怎么办了。那个材料用6M的盐酸反应2h后水解,明胶能用酸水解吗?
8楼2014-12-02 08:56:21
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csbcook

木虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by csbcook at 2014-12-02 08:56:21
谢谢你的大力帮助,我现在面临一个问题希望能请教一下,我们做了一种材料,用明胶和它发生交联反应,现在要测这种材料上连接了多少的明胶,还不能用测剩余凝胶的量来确定。现在不知道怎么办了。那个材料用6M的盐酸 ...

那个材料在120度下,用6M的盐酸反应2h后水解,不知道这个反应条件下明胶会不会也水解完了?
9楼2014-12-02 09:02:32
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csbcook

木虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 99503102 at 2014-12-01 18:14:56
你可以加大浓度试试,多做个实验嘛,也不难,看是不是这个原因。酸水解后的明胶,如果用考马斯亮兰法测,那么测定结果还是蛋白质的残留量,绝不是氨基酸的。
...

那个材料在120度下,用6M的盐酸反应2h后水解,不知道这个反应条件下明胶会不会也水解完了?
10楼2014-12-02 09:03:29
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