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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 食品 » 粮油与蛋白 » 明胶与考马斯亮蓝的染色问题
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csbcook

木虫 (小有名气)

[求助] 明胶与考马斯亮蓝的染色问题 已有4人参与

我将0.03g明胶溶到蒸馏水里，完全溶解后，取1ml与5ml考马斯亮蓝溶液反应，20min后用紫外分光光度计595nm检测吸光度，发现完全没有吸收，请教各位到底是什么原因？谢啦
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1楼 2014-12-01 11:36:08
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

99503102

版主 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by csbcook at 2014-12-01 16:48:28
1ml明胶的浓度是1.5mg/ml，用的也是G250，感觉浓度不算低吧，没有吸光度啊就是。还想请教一下，如果将明胶用盐酸水解，那么水解产生的氨基酸还能用考马斯亮蓝检测吗？谢谢...

你可以加大浓度试试，多做个实验嘛，也不难，看是不是这个原因。酸水解后的明胶，如果用考马斯亮兰法测，那么测定结果还是蛋白质的残留量，绝不是氨基酸的。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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微信公众号：食安小屋
4楼2014-12-01 18:14:56
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是水货

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
浓度你配10mg/L，就没问题。
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5楼2014-12-01 18:38:13
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煜，莫烦恼

木虫 (著名写手)

虫蛹

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
pH 有没有问题；双缩尿，考马斯，BCA显色前提应该都是碱性环境。
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努力努力，奋斗奋斗！
11楼2014-12-02 09:39:59
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小毛孩24

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
明胶用酸也会水解的。
测蛋白考马斯亮蓝不是全都适用的，可以试试凯氏定氮，蛋白都可以
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12楼2014-12-02 13:32:17
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小毛孩24

专家顾问 (职业作家)
引用回帖:
13楼: Originally posted by csbcook at 2014-12-02 13:51:17
谢谢支持，请问一下6M的盐酸，120°下反应2.5h，明胶能保持不水解不？...

没有做过，我个人感觉会水解
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14楼2014-12-02 15:12:07
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是水货

木虫 (著名写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by csbcook at 2014-12-02 08:56:21
谢谢你的大力帮助，我现在面临一个问题希望能请教一下，我们做了一种材料，用明胶和它发生交联反应，现在要测这种材料上连接了多少的明胶，还不能用测剩余凝胶的量来确定。现在不知道怎么办了。那个材料用6M的盐酸 ...

你做的是什么材料？膜？在测明胶羟脯氨酸含量的时候高温水解，你这样做明胶完全水解了。
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15楼2014-12-02 18:07:55
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普通回帖

99503102

版主 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
csbcook: 金币+20, ★有帮助 2014-12-02 17:33:18
考马斯亮兰有G250和R250两种，测蛋白含量用的是G250，这个不能搞混了。如果用的是G250，会不会是你的明胶浓度太低（1ml明胶浓度没标明），检测不出呢？

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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微信公众号：食安小屋
2楼2014-12-01 15:22:28
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csbcook

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 99503102 at 2014-12-01 15:22:28
考马斯亮兰有G250和R250两种，测蛋白含量用的是G250，这个不能搞混了。如果用的是G250，会不会是你的明胶浓度太低（1ml明胶浓度没标明），检测不出呢？

1ml明胶的浓度是1.5mg/ml，用的也是G250，感觉浓度不算低吧，没有吸光度啊就是。还想请教一下，如果将明胶用盐酸水解，那么水解产生的氨基酸还能用考马斯亮蓝检测吗？谢谢
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3楼2014-12-01 16:48:28
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是水货

木虫 (著名写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 是水货 at 2014-12-01 18:38:13
浓度你配10mg/L，就没问题。

写错了，是10mg/mL
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6楼2014-12-01 19:40:38
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csbcook

木虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 99503102 at 2014-12-01 18:14:56
你可以加大浓度试试，多做个实验嘛，也不难，看是不是这个原因。酸水解后的明胶，如果用考马斯亮兰法测，那么测定结果还是蛋白质的残留量，绝不是氨基酸的。
...

谢谢你的大力帮助，我现在面临一个问题希望能请教一下，我们做了一种材料，用明胶和它发生交联反应，现在要测这种材料上连接了多少的明胶，还不能用测剩余凝胶的量来确定。现在不知道怎么办了。
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7楼2014-12-02 08:53:02
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csbcook

木虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 是水货 at 2014-12-01 18:38:13
浓度你配10mg/L，就没问题。

谢谢你的大力帮助，我现在面临一个问题希望能请教一下，我们做了一种材料，用明胶和它发生交联反应，现在要测这种材料上连接了多少的明胶，还不能用测剩余凝胶的量来确定。现在不知道怎么办了。那个材料用6M的盐酸反应2h后水解，明胶能用酸水解吗？
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8楼2014-12-02 08:56:21
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csbcook

木虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by csbcook at 2014-12-02 08:56:21
谢谢你的大力帮助，我现在面临一个问题希望能请教一下，我们做了一种材料，用明胶和它发生交联反应，现在要测这种材料上连接了多少的明胶，还不能用测剩余凝胶的量来确定。现在不知道怎么办了。那个材料用6M的盐酸 ...

那个材料在120度下，用6M的盐酸反应2h后水解，不知道这个反应条件下明胶会不会也水解完了？
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9楼2014-12-02 09:02:32
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csbcook

木虫 (小有名气)
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4楼: Originally posted by 99503102 at 2014-12-01 18:14:56
你可以加大浓度试试，多做个实验嘛，也不难，看是不是这个原因。酸水解后的明胶，如果用考马斯亮兰法测，那么测定结果还是蛋白质的残留量，绝不是氨基酸的。
...

那个材料在120度下，用6M的盐酸反应2h后水解，不知道这个反应条件下明胶会不会也水解完了？
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10楼2014-12-02 09:03:29
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