应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 引物设计
151/2返回列表12下一页
查看: 1496  |  回复: 14
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

贝努努哈哈

铜虫 (小有名气)

[求助] 引物设计 已有3人参与

大家看一下我设计的引物合适不

引物设计
J1$K[$VC5~4D0L~}ZSDL2TT.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2014-11-26 15:51:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

soarrow

铁杆木虫 (正式写手)

酱油歪楼党

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-11-29 15:15:09
看了一下第一对引物，二聚体的概率不小--即使去除了酶切位点。把酶切位点加上之后，二聚体更多了。
上下游引物进行blast以后，与假丝酵母Candida utilis匹配度挺好，但是也与毕赤酵母Pichia jadinii strain CCTCC AY204007 uricase gene存在很高匹配。特异性有所影响，不过影响应该不大。
总体来说，应该能用。

一个小经验，设计引物时候可以多设计合成两套，到时候几套一起测试，哪套好用用哪套---毕竟现在引物和PCR反应液都很便宜了。
赞一下(2人) 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

贝努努哈哈
2楼2014-11-29 01:09:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

peng~yu

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

这个没有什么好不好的，现在我设计引物基本上都用眼看。建议楼主先去合成一下不加酶切位点的引物，能扩出来的话，直接把其他的东西写在引物的5'端就可以了。我们实验室在我的带领下都是这个设计的，特别的简单～楼主可以试试呢
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2014-11-30 01:16:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lutu2013

新虫 (初入文坛)
用高保真酶扩，是没有问题!
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2014-11-30 13:06:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

soarrow

铁杆木虫 (正式写手)

酱油歪楼党
引用回帖:
2楼: Originally posted by soarrow at 2014-11-29 01:09:54
看了一下第一对引物，二聚体的概率不小--即使去除了酶切位点。把酶切位点加上之后，二聚体更多了。
上下游引物进行blast以后，与假丝酵母Candida utilis匹配度挺好，但是也与毕赤酵母Pichia jadinii strain CCTCC  ...

上个截图，第一对引物去掉酶切位点以后粗略看了一眼

引物设计-1
未标题-1 拷贝.gif
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

贝努努哈哈
3楼2014-11-29 01:12:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

天地一微尘

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-11-29 15:15:15
实际操作以后再说吧。很多时候用软件设计出来的不见得能扩增出来。我前段时间就遇到过这种情况，设计好了引物，各个条件都好，用软件模拟扩增也能扩出来，但实际中就是得不到目的条带。摸索了各种条件，再换了好几对引物都不行，直到最后换了酶才OK。所以楼主还是实际P一下再看吧。
赞一下 回复此楼
4楼2014-11-29 14:39:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

peng~yu

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

另外补充一点，由我做实验的经验来看，什么引物二聚体，自身互补啥的，基本上对反应结果没啥影响（只要不是多重就没事），主要就看两个引物退火温度差不多（3度之内吧）就好啦～楼主加油！！
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

贝努努哈哈
6楼2014-11-30 01:17:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ccandcc

木虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by peng~yu at 2014-11-30 01:16:06
这个没有什么好不好的，现在我设计引物基本上都用眼看。建议楼主先去合成一下不加酶切位点的引物，能扩出来的话，直接把其他的东西写在引物的5'端就可以了。我们实验室在我的带领下都是这个设计的，特别的简单～楼主 ...

对头 我们试验室也是这个风气，简单高效，
实在不行多弄两个引物，效率最重要
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

贝努努哈哈
7楼2014-11-30 11:06:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wuwenmei

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by peng~yu at 2014-11-30 01:17:51
另外补充一点，由我做实验的经验来看，什么引物二聚体，自身互补啥的，基本上对反应结果没啥影响（只要不是多重就没事），主要就看两个引物退火温度差不多（3度之内吧）就好啦～楼主加油！！

哇，知道了，以后可以请教你，
赞一下 回复此楼
下雨天就算没有伞，我也要学会努力奔跑！
9楼2014-11-30 18:38:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

贝努努哈哈

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by soarrow at 2014-11-29 01:09:54
看了一下第一对引物，二聚体的概率不小--即使去除了酶切位点。把酶切位点加上之后，二聚体更多了。
上下游引物进行blast以后，与假丝酵母Candida utilis匹配度挺好，但是也与毕赤酵母Pichia jadinii strain CCTCC  ...

10楼2014-12-08 16:21:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 贝努努哈哈 的主题更新
151/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 重要来源：本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +5 医学老男孩 2026-08-13 11/550 2026-08-13 15:41 by sdfapple719
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +4 布布和一二 2026-08-11 5/250 2026-08-13 12:56 by cratir
[基金申请] FileCode能看出啥？ +8 要乐观耀哥 2026-08-10 26/1300 2026-08-13 12:01 by Tide man
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +9 majunge000 2026-08-10 11/550 2026-08-13 10:40 by ZH远山
[基金申请] 我的国基提前知道中了，可是同事的操作让我实在接受不了，怎么会有这样的人 +9 家与远方 2026-08-10 14/700 2026-08-13 09:41 by 臭臭不臭01
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +22 Lanmanbaby 2026-08-09 36/1800 2026-08-12 22:50 by sdfapple719
[基金申请] 好奇怪的filecode +5 布布和一二 2026-08-08 6/300 2026-08-12 16:11 by 云上清扬
[基金申请] filecode +13 documentary 2026-08-10 15/750 2026-08-12 15:56 by 云上清扬
[论文投稿] 职称评审，求友友推荐见刊最快的期刊 +4 工厂打螺丝 2026-08-08 4/200 2026-08-12 09:18 by hansi2025
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果？ +3 yuleib84 2026-08-11 3/150 2026-08-11 21:53 by jnhyjjm
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[硕博家园] 读博的好处 +3 lnee 2026-08-11 3/150 2026-08-11 18:10 by 希望我好好的
[基金申请] 基金中了 +15 laoda193707 2026-08-06 15/750 2026-08-11 00:11 by jiafei2190
[基金申请] 关于filecode，很负责任的告诉大家 +6 爱看书的可乐 2026-08-08 7/350 2026-08-08 22:13 by a_niu
[基金申请] 国基金的申报应该改成非等额制，评价高的钱多评价低的钱少，但是增加资助率 +7 a089 2026-08-07 7/350 2026-08-08 18:05 by gltch
[基金申请] 关于filecode +4 布布和一二 2026-08-07 7/350 2026-08-07 22:55 by zhanghaozhu
[基金申请] 固定端突然变了，今天 +6 archvillain 2026-08-06 10/500 2026-08-07 16:03 by 医学老男孩
[基金申请] filecode变化情况 +6 布布和一二 2026-08-07 22/1100 2026-08-07 14:45 by 且听虎啸
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭