24小时热门版块排行榜    

查看: 1665  |  回复: 14
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

贝努努哈哈

铜虫 (小有名气)

[求助] 引物设计 已有3人参与

大家看一下我设计的引物合适不

引物设计
J1$K[$VC5~4D0L~}ZSDL2TT.jpg
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

贝努努哈哈

铜虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
7楼: Originally posted by ccandcc at 2014-11-30 11:06:26
对头 我们试验室也是这个风气,简单高效,
实在不行多弄两个引物,效率最重要...

非常感谢
15楼2014-12-08 16:25:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 15 个回答

soarrow

铁杆木虫 (正式写手)

酱油歪楼党

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-11-29 15:15:09
看了一下第一对引物,二聚体的概率不小--即使去除了酶切位点。把酶切位点加上之后,二聚体更多了。
上下游引物进行blast以后,与假丝酵母Candida utilis匹配度挺好,但是也与毕赤酵母Pichia jadinii strain CCTCC AY204007 uricase gene存在很高匹配。特异性有所影响,不过影响应该不大。
总体来说,应该能用。

一个小经验,设计引物时候可以多设计合成两套,到时候几套一起测试,哪套好用用哪套---毕竟现在引物和PCR反应液都很便宜了。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

2楼2014-11-29 01:09:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

soarrow

铁杆木虫 (正式写手)

酱油歪楼党

引用回帖:
2楼: Originally posted by soarrow at 2014-11-29 01:09:54
看了一下第一对引物,二聚体的概率不小--即使去除了酶切位点。把酶切位点加上之后,二聚体更多了。
上下游引物进行blast以后,与假丝酵母Candida utilis匹配度挺好,但是也与毕赤酵母Pichia jadinii strain CCTCC  ...

上个截图,第一对引物去掉酶切位点以后粗略看了一眼

引物设计-1
未标题-1 拷贝.gif

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

3楼2014-11-29 01:12:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

天地一微尘

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-11-29 15:15:15
实际操作以后再说吧。很多时候用软件设计出来的不见得能扩增出来。我前段时间就遇到过这种情况,设计好了引物,各个条件都好,用软件模拟扩增也能扩出来,但实际中就是得不到目的条带。摸索了各种条件,再换了好几对引物都不行,直到最后换了酶才OK。所以楼主还是实际P一下再看吧。
4楼2014-11-29 14:39:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +6 zSbvVX9JFl9J 2026-11-09 9/450 2026-11-13 11:13 by Equinoxhua
[考博] 27博士申请 +5 白白白ly 2026-11-09 5/250 2026-11-13 05:01 by wlf1982
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 TgvkbZZl9tqB 2026-11-11 4/200 2026-11-12 12:51 by ECLTXnJnRSXf
[公派出国] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 TgvkbZZl9tqB 2026-11-11 4/200 2026-11-12 12:48 by ECLTXnJnRSXf
[考博] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 TgvkbZZl9tqB 2026-11-11 6/300 2026-11-12 12:42 by ECLTXnJnRSXf
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 cdqGD6ftHmbl 2026-11-11 5/250 2026-11-12 12:28 by ECLTXnJnRSXf
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +7 czAiolzR0IJC 2026-11-10 9/450 2026-11-12 11:00 by HajghKOMynmz
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 G2rhSvqvhNzl 2026-11-10 6/300 2026-11-12 10:38 by HajghKOMynmz
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +5 C6CRn66RYYXS 2026-11-10 7/350 2026-11-12 10:16 by HajghKOMynmz
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +7 FChKX8meu1ds 2026-11-09 9/450 2026-11-12 10:03 by HajghKOMynmz
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +6 FChKX8meu1ds 2026-11-09 11/550 2026-11-12 09:57 by HajghKOMynmz
[公派出国] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 FChKX8meu1ds 2026-11-09 10/500 2026-11-12 09:52 by HajghKOMynmz
[教师之家] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 TgvkbZZl9tqB 2026-11-11 3/150 2026-11-12 08:26 by HajghKOMynmz
[论文投稿] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 cdqGD6ftHmbl 2026-11-11 3/150 2026-11-12 07:53 by HajghKOMynmz
[考研] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 cdqGD6ftHmbl 2026-11-11 3/150 2026-11-12 07:53 by HajghKOMynmz
[教师之家] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 C6CRn66RYYXS 2026-11-10 4/200 2026-11-12 06:03 by 9fOTqj074tIg
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 YHiw1gou1Eda 2026-11-10 7/350 2026-11-12 05:39 by 9fOTqj074tIg
[基金申请] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 FChKX8meu1ds 2026-11-09 7/350 2026-11-12 05:30 by 9fOTqj074tIg
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 cqv1zKnzd7hr 2026-11-09 8/400 2026-11-12 05:08 by 9fOTqj074tIg
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +5 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 16/800 2026-11-09 11:47 by GwrQVVR6Oenx
信息提示
请填处理意见