24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 1425  |  回复: 14
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

贝努努哈哈

铜虫 (小有名气)

[求助] 引物设计 已有3人参与

大家看一下我设计的引物合适不

引物设计
J1$K[$VC5~4D0L~}ZSDL2TT.jpg
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

贝努努哈哈

铜虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
6楼: Originally posted by peng~yu at 2014-11-30 01:17:51
另外补充一点,由我做实验的经验来看,什么引物二聚体,自身互补啥的,基本上对反应结果没啥影响(只要不是多重就没事),主要就看两个引物退火温度差不多(3度之内吧)就好啦~楼主加油!!

谢谢宝贵意见 近期没上小木虫
12楼2014-12-08 16:22:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 15 个回答

soarrow

铁杆木虫 (正式写手)

酱油歪楼党

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-11-29 15:15:09
看了一下第一对引物,二聚体的概率不小--即使去除了酶切位点。把酶切位点加上之后,二聚体更多了。
上下游引物进行blast以后,与假丝酵母Candida utilis匹配度挺好,但是也与毕赤酵母Pichia jadinii strain CCTCC AY204007 uricase gene存在很高匹配。特异性有所影响,不过影响应该不大。
总体来说,应该能用。

一个小经验,设计引物时候可以多设计合成两套,到时候几套一起测试,哪套好用用哪套---毕竟现在引物和PCR反应液都很便宜了。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

2楼2014-11-29 01:09:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

soarrow

铁杆木虫 (正式写手)

酱油歪楼党

引用回帖:
2楼: Originally posted by soarrow at 2014-11-29 01:09:54
看了一下第一对引物,二聚体的概率不小--即使去除了酶切位点。把酶切位点加上之后,二聚体更多了。
上下游引物进行blast以后,与假丝酵母Candida utilis匹配度挺好,但是也与毕赤酵母Pichia jadinii strain CCTCC  ...

上个截图,第一对引物去掉酶切位点以后粗略看了一眼

引物设计-1
未标题-1 拷贝.gif

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

3楼2014-11-29 01:12:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

天地一微尘

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-11-29 15:15:15
实际操作以后再说吧。很多时候用软件设计出来的不见得能扩增出来。我前段时间就遇到过这种情况,设计好了引物,各个条件都好,用软件模拟扩增也能扩出来,但实际中就是得不到目的条带。摸索了各种条件,再换了好几对引物都不行,直到最后换了酶才OK。所以楼主还是实际P一下再看吧。
4楼2014-11-29 14:39:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 289 分105500药学专硕求调剂(找B区学校) +5 白云123456789 2026-04-13 5/250 2026-04-19 18:12 by Equinoxhua
[考研] 求调剂推荐 +9 小聂爱学习 2026-04-14 9/450 2026-04-19 17:03 by 中豫男
[考研] 0854求调剂 +23 门路摸摸 2026-04-15 27/1350 2026-04-19 01:59 by 烟雨流涯
[考研] 300求调剂 +12 橙a777 2026-04-15 12/600 2026-04-18 23:51 by 路病情
[考研] 一志愿沪9,326求生物学调剂 +12 刘墨墨 2026-04-13 12/600 2026-04-18 23:31 by 路病情
[考研] 297,工科调剂? +5 河南农业大学-能 2026-04-14 5/250 2026-04-18 15:17 by Equinoxhua
[考研] 22408 312求调剂 +24 门路摸摸 2026-04-14 26/1300 2026-04-18 13:04 by wunaiy88
[考研] 260求调剂 +4 Zyt1314520.. 2026-04-17 5/250 2026-04-18 08:28 by babysonlkd
[考研] 一志愿华中农业071010,320求调剂 +17 困困困困坤坤 2026-04-14 19/950 2026-04-17 20:08 by 关一盏灯cd
[考研] 295分求调剂 +5 ?要上岸? 2026-04-17 5/250 2026-04-17 16:51 by fenglj492
[考研] 26药学专硕105500求调剂 +6 喽哈加油 2026-04-13 7/350 2026-04-16 14:31 by zhouxiaoyu
[考博] 申博自荐 +3 Linxia林夏 2026-04-13 3/150 2026-04-16 12:55 by 墨荷之露
[基金申请] RY:中国产出的科学垃圾论文,绝对数量和比例都世界第一 +7 zju2000 2026-04-14 18/900 2026-04-16 11:36 by 欢乐颂叶蓁
[考研] 求调剂学校 +14 不会吃肉 2026-04-13 16/800 2026-04-15 21:59 by noqvsozv
[考研] 297,工科调剂? +10 河南农业大学-能 2026-04-14 10/500 2026-04-15 21:50 by noqvsozv
[考研] 通信工程求调剂!!! +6 zlb770521 2026-04-14 6/300 2026-04-15 20:00 by 学员JpLReM
[考研] 085801电气专硕272求调剂 +19 电气李 2026-04-13 21/1050 2026-04-15 13:37 by 黑科技矿业
[教师之家] 转长聘了 +7 简单化xn 2026-04-13 7/350 2026-04-14 14:50 by xindong
[考研] 085408光电信息工程专硕355一志愿长春光机所调剂 +6 王ymaa 2026-04-13 13/650 2026-04-14 11:33 by 王ymaa
[考研] 245求调剂 +6 冰糖橘?汽水 2026-04-13 10/500 2026-04-14 10:49 by jyl0317
信息提示
请填处理意见