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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 急求!!各位大侠，关于转染到动物身上的质粒有何要求？
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jiankang87

新虫 (初入文坛)

[求助] 急求!!各位大侠，关于转染到动物身上的质粒有何要求？ 已有2人参与

我最近两次提取了pGFP（绿色荧光蛋白）质粒，目的是将其与一种纳米载体相结合，然后注入到裸小鼠体内，我采用的是天根的去内毒素的质粒大提试剂盒，目前已经提过两次，OD260/280检测均在1.8以上。按照试剂盒要求，最后一步洗脱质粒DNA我是在超净台内采用的无菌双蒸水。今天我同学和我说，必须先在细胞层面试一试，看看是否有污染，还要进行下电泳测试，看看提取的是否是需要的那种质粒。我不太明白
1.整个提取质粒过程，除了最后一步是在超净台里操作的，前面的都是在空气中操作的，那么请问这样如何可以保证绝对无菌？
2.如何确定是否目前提出来的就是我需要的那种质粒？
3.直接注射到裸鼠体内的质粒有何要求？在目前提取后还需要进行什么特殊处理吗？
实验非常着急，请各位大侠不吝赐教啊。
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上帝保佑我
1楼 2014-11-05 21:00:24
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myheat

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-11-05 23:05:10
无菌的话过0.22um的膜

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2楼2014-11-05 21:01:59
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Never 漂流

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

1，确定是否是要的质粒？
通过你的对你质粒上的位点进行酶切进行琼脂糖跑胶分子量鉴定。具体使用酶搜索你的质粒。
2，质粒转染动物要与lip2000等形成复合物后转染。
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3楼2016-03-30 13:22:19
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