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jiankang87

新虫 (初入文坛)

[求助] 急求!!各位大侠,关于转染到动物身上的质粒有何要求? 已有2人参与

我最近两次提取了pGFP(绿色荧光蛋白)质粒,目的是将其与一种纳米载体相结合,然后注入到裸小鼠体内,我采用的是天根的去内毒素的质粒大提试剂盒,目前已经提过两次,OD260/280检测均在1.8以上。按照试剂盒要求,最后一步洗脱质粒DNA我是在超净台内采用的无菌双蒸水。今天我同学和我说,必须先在细胞层面试一试,看看是否有污染,还要进行下电泳测试,看看提取的是否是需要的那种质粒。我不太明白
1.整个提取质粒过程,除了最后一步是在超净台里操作的,前面的都是在空气中操作的,那么请问这样如何可以保证绝对无菌?
2.如何确定是否目前提出来的就是我需要的那种质粒?
3.直接注射到裸鼠体内的质粒有何要求?在目前提取后还需要进行什么特殊处理吗?
实验非常着急,请各位大侠不吝赐教啊。
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上帝保佑我
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myheat

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2014-11-05 23:05:10
无菌的话过0.22um的膜

[ 发自小木虫客户端 ]
2楼2014-11-05 21:01:59
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Never 漂流

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

1,确定是否是要的质粒?
通过你的对你质粒上的位点进行酶切进行琼脂糖跑胶分子量鉴定。具体使用酶搜索你的质粒。
2,质粒转染动物要与lip2000等形成复合物后转染。
3楼2016-03-30 13:22:19
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