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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 构建丝状真菌转化子，产生一个没有终止子的基因，请问它会如何转录和表达？求大神！
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奇怪人生123

银虫 (小有名气)

[求助] 构建丝状真菌转化子，产生一个没有终止子的基因，请问它会如何转录和表达？求大神！ 已有1人参与

我一直在做灰绿曲霉的相关研究，为了将我的目的蛋白与GFP融合表达，所以构建一个叫做pXL-zeo的质粒，通过单交换获得转化子，见我的附件图。
最上方的是我构建的质粒，中间写有“WT”的是野生株的基因组，最下方“NEW TYPE”指得到的转化子的基因型。
对于转化子的基因型，在前面的部位产生了一个有启动子+目的基因完整ORF（但没有终止子）的“基因”，紧跟其后的是构建质粒上的一部分序列，在后面的一坨就是抗性基因和我想要的表达盒。
那么问题来了！前方“启动子+目的基因完整ORF”会如何转录及表达呢？希望各位大神能稍详尽的分析，最好能有一些资料。

PS：我对目的基因和gfp做了Real-time PCR，得到目的基因veA表达量非常高，gfp表达量相对低，但是通过转化子的表型分析，该转化子更像是目的基因功能缺失的菌株。

构建丝状真菌转化子，产生一个没有终止子的基因，请问它会如何转录和表达？求大神！
单交换.png
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1楼 2014-10-23 15:48:08
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bolysu

禁虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
奇怪人生123: 金币+5, ★有帮助 2014-10-27 12:12:09
本帖内容被屏蔽
2楼2014-10-25 10:53:23
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奇怪人生123

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by bolysu at 2014-10-25 10:53:23
不知道你在做定量PCR时，是否选择的是目的基因的一小段？在进行单交换时，并不是整个目的基因完整的交换，而是一部分交换，这样也可以达到整个质粒插入的，你的很有可能是部分交换，导致表达终止，可以用完整的引物 ...

1. 定量PCR时，确实是目的基因的一段，大概90bp左右。另外我也都对gfp基因做了定量PCR，二者的表达量差别很大。
2. 关于单交换，你说的很对  只是在我构建的质粒pXL-zeo上，基因的ORF是完整的，如果与菌基因组里的ORF单交换的话，应该会形成两个完整的目的基因ORF的吧。。。对于验证，我都已经做过了，是上图所示的状况！
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实时荧光定量PCR（TaqMan探针法）欢迎和大家探讨~
3楼2014-10-27 12:11:50
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