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带走云彩

银虫 (小有名气)

[求助] 酵母破碎用什么方法简单？ 已有3人参与

使用毕赤酵母微量表达蛋白（胞内），请教各位如何快速简便破碎细胞SDS跑胶检测蛋白？
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怎知一死生为虚诞？
1楼 2014-10-22 07:37:30
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jjf139

金虫 (著名写手)

新药研发&药物分析
超声，液氮研磨

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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2楼2014-10-22 07:53:20
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带走云彩

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by jjf139 at 2014-10-22 07:53:20
超声，液氮研磨

看到过，感觉量有点多，我想用1.5ml菌液沉淀来做。
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怎知一死生为虚诞？
3楼2014-10-22 08:00:43
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wanglulu0813

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 鼓励交流 2014-10-22 12:24:55
带走云彩: 金币+1, ★有帮助 2014-10-22 12:26:44
超声啊，多简单， 以前做的时候为了效果好点超声之前还可以反复冻融
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4楼2014-10-22 08:33:06
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林家女孩

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 鼓励交流 2014-10-22 12:24:58
带走云彩: 金币+1, ★有帮助 2014-10-22 12:26:32
之前做的时候是用反复冻融的
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5楼2014-10-22 09:35:21
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带走云彩

银虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 林家女孩 at 2014-10-22 09:35:21
之前做的时候是用反复冻融的

只用反复冻融么？效果怎么样？
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怎知一死生为虚诞？
6楼2014-10-22 12:26:09
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素锦流年wang

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 带走云彩 at 2014-10-22 12:26:09
只用反复冻融么？效果怎么样？...

不知道你的试验进展咋样了？我也在做毕赤酵母的真核表达，用的载体，细胞和你的一样，本应该是分泌性表达的，可是上清样电泳看不到条带，打算看下细胞内的，想了解下快速破壁分析方法。
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唯有努力才是永恒的需求，你若盛开，蝴蝶自来。
7楼2014-12-17 10:00:08
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cashq

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by 素锦流年wang at 2014-12-17 10:00:08
不知道你的试验进展咋样了？我也在做毕赤酵母的真核表达，用的载体，细胞和你的一样，本应该是分泌性表达的，可是上清样电泳看不到条带，打算看下细胞内的，想了解下快速破壁分析方法。...

我是用玻璃珠+多样品组织研磨机破碎细胞的，破碎效果比用超声波要好。我是提取酵母mRNA和内源蛋白时候做的~破碎细胞之后分子保留得挺完整的。我觉得你也可以试试~
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生活在于折腾呐
8楼2015-04-13 16:59:04
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rainsunne

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 带走云彩 at 2014-10-22 08:00:43
看到过，感觉量有点多，我想用1.5ml菌液沉淀来做。...

我刚开始做这个，要破碎的酵母量也挺多，想问你最后是用了什么方法解决的呀？超声一次能做的量太小了，效果也不好
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9楼2015-04-14 15:34:29
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rainsunne

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by cashq at 2015-04-13 16:59:04
我是用玻璃珠+多样品组织研磨机破碎细胞的，破碎效果比用超声波要好。我是提取酵母mRNA和内源蛋白时候做的~破碎细胞之后分子保留得挺完整的。我觉得你也可以试试~...

用多样品组织研磨机做的量大吗？
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10楼2015-04-16 09:41:13
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