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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 分子生理 » 关于提取植物组织总RNA的问题
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L-木木

新虫 (初入文坛)

[求助] 关于提取植物组织总RNA的问题 已有1人参与

我们已经trizol法提取RNA近两个月了，还是没有成功。具体的步骤都很注意了，用的全部都是灭RNA酶的工具，但就是不知道问题出在哪里，跑胶老是跑不出来。
我们使用的植物叶片是经过较长时间的储存的（四个月左右，在-20度的冰箱），不知道这是不是导致实验失败的原因？
我看很多地方都强调加trizol之前要注意不能解冻。可是实际操作的时候，用液氮研磨后，装进离心管的过程中怎么才能保证始终处于低温呢？
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1楼 2014-10-19 13:43:15
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86553117

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
L-木木(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-12-26 20:22:35
样品已经废掉了，-20储存是不行的，况且4个月了，降解没了，液氮中或-80存可，呵呵
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2楼2014-12-09 21:23:07
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86553117

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

还有第二个问题，刚看到，样品研磨时一定要快速，同时将准备盛装粉末的离心管液氮中冻透后，盛满液氮正放于支架上，粉末研好后，管子也低温(剩余液氮倒掉即可)，正好搭配，我是这么干的，呵呵，挺实用。
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3楼2014-12-09 21:27:10
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ncuhxm

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 86553117 at 2014-12-09 21:27:10
还有第二个问题，刚看到，样品研磨时一定要快速，同时将准备盛装粉末的离心管液氮中冻透后，盛满液氮正放于支架上，粉末研好后，管子也低温(剩余液氮倒掉即可)，正好搭配，我是这么干的，呵呵，挺实用。

请问你怎么把你研磨好的样品加到管子里去？
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4楼2014-12-26 19:16:03
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86553117

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by ncuhxm at 2014-12-26 19:16:03
请问你怎么把你研磨好的样品加到管子里去？...

研磨好之后，用不锈钢药匙转移进去的，一般盛2下就够量了，呵呵
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5楼2014-12-28 16:42:16
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骑象人2014

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 86553117 at 2014-12-28 16:42:16
研磨好之后，用不锈钢药匙转移进去的，一般盛2下就够量了，呵呵...

请问你的液氮是怎么加到离心管中去的？用镊子夹着离心管舀的吗？
可以先加TRIzol在离心管中，粉末就加进TRIzol中，RNA应该不会降解吧，没有必要连离心管都冻吧？
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6楼2015-01-05 21:14:05
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86553117

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 骑象人2014 at 2015-01-05 21:14:05
请问你的液氮是怎么加到离心管中去的？用镊子夹着离心管舀的吗？
可以先加TRIzol在离心管中，粉末就加进TRIzol中，RNA应该不会降解吧，没有必要连离心管都冻吧？...

将离心管开盖子后直接扔入泡沫盒的液氮中，冻透后用镊子直接舀出来即可，放置于双面板上，开始磨样，完后，将离心管中的剩余液氮倒掉，开始转移粉末至离心管中，当然你提到的先加trizol，再转移粉末也是可以的，这两种方法我都用过，效果都不错，只是第一种中一定要将液氮倒掉后再转移粉末，否则加trizol后易迸溅，危险，呵呵
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7楼2015-01-06 19:41:47
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骑象人2014

铁虫 (初入文坛)
8楼2015-01-07 09:54:22
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