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L-木木

新虫 (初入文坛)

[求助] 关于提取植物组织总RNA的问题 已有1人参与

我们已经trizol法提取RNA近两个月了,还是没有成功。具体的步骤都很注意了,用的全部都是灭RNA酶的工具,但就是不知道问题出在哪里,跑胶老是跑不出来。
我们使用的植物叶片是经过较长时间的储存的(四个月左右,在-20度的冰箱),不知道这是不是导致实验失败的原因?
我看很多地方都强调加trizol之前要注意不能解冻。可是实际操作的时候,用液氮研磨后,装进离心管的过程中怎么才能保证始终处于低温呢?
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86553117

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


L-木木(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-12-26 20:22:35
样品已经废掉了,-20储存是不行的,况且4个月了,降解没了,液氮中或-80存可,呵呵
2楼2014-12-09 21:23:07
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86553117

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

还有第二个问题,刚看到,样品研磨时一定要快速,同时将准备盛装粉末的离心管液氮中冻透后,盛满液氮正放于支架上,粉末研好后,管子也低温(剩余液氮倒掉即可),正好搭配,我是这么干的,呵呵,挺实用。
3楼2014-12-09 21:27:10
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ncuhxm

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 86553117 at 2014-12-09 21:27:10
还有第二个问题,刚看到,样品研磨时一定要快速,同时将准备盛装粉末的离心管液氮中冻透后,盛满液氮正放于支架上,粉末研好后,管子也低温(剩余液氮倒掉即可),正好搭配,我是这么干的,呵呵,挺实用。

请问你怎么把你研磨好的样品加到管子里去?
4楼2014-12-26 19:16:03
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86553117

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by ncuhxm at 2014-12-26 19:16:03
请问你怎么把你研磨好的样品加到管子里去?...

研磨好之后,用不锈钢药匙转移进去的,一般盛2下就够量了,呵呵
5楼2014-12-28 16:42:16
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骑象人2014

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 86553117 at 2014-12-28 16:42:16
研磨好之后,用不锈钢药匙转移进去的,一般盛2下就够量了,呵呵...

请问你的液氮是怎么加到离心管中去的?用镊子夹着离心管舀的吗?
可以先加TRIzol在离心管中,粉末就加进TRIzol中,RNA应该不会降解吧,没有必要连离心管都冻吧?
6楼2015-01-05 21:14:05
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86553117

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 骑象人2014 at 2015-01-05 21:14:05
请问你的液氮是怎么加到离心管中去的?用镊子夹着离心管舀的吗?
可以先加TRIzol在离心管中,粉末就加进TRIzol中,RNA应该不会降解吧,没有必要连离心管都冻吧?...

将离心管开盖子后直接扔入泡沫盒的液氮中,冻透后用镊子直接舀出来即可,放置于双面板上,开始磨样,完后,将离心管中的剩余液氮倒掉,开始转移粉末至离心管中,当然你提到的先加trizol,再转移粉末也是可以的,这两种方法我都用过,效果都不错,只是第一种中一定要将液氮倒掉后再转移粉末,否则加trizol后易迸溅,危险,呵呵
7楼2015-01-06 19:41:47
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骑象人2014

铁虫 (初入文坛)

8楼2015-01-07 09:54:22
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