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ddcdqr

新虫 (初入文坛)

[求助] 怎么用Western blot检测全菌中的某个抗体? 已有3人参与

各位虫友,我最近通过原核表达获得了细菌的某个蛋白,并制备了多抗(免疫兔子),现在想用这个多抗去筛选有这个蛋白的细菌。但是这个细菌是革兰氏阳性菌,直接煮样的话,SDS-PAGE跑不下去,用溶菌酶处理,结果全都跑到最底部了,怎么处理比较好呢?纠结啊。。。
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bio_sci

捐助贵宾 (正式写手)


【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
超声处理,或者反复冻融

[ 发自小木虫客户端 ]
2楼2014-10-15 10:52:49
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hyuqing

捐助贵宾 (小有名气)

Enriching beads


【答案】应助回帖

LZ只是想要将能产目的蛋白的细菌筛选出来时吧,对于Western blot这个方法,我不是很了解。但是我倒是有别的方法能够将目的细菌抓出来。
Western blot只是能将细菌固定然后通过与一抗结合显现位置。
那为什么我们不用类似于免疫沉淀的方式将生物样品提取出来呢?
就是将一抗接于纳米磁球上,然后通过一抗与目的蛋白结合从而筛选出相应的细菌。
然后通过相应的仪器将磁球吸附出来,就可以得到目的细菌了吧。
3楼2014-10-24 11:23:06
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wxy_0808

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

直接煮沸什么都跑不出来的,溶菌酶处理效果没试过。机械破碎后再煮沸吧。

发自小木虫Android客户端
4楼2015-11-21 17:45:41
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wxy_0808

铁杆木虫 (正式写手)

对了,溶菌酶处理后,用多大浓度的分离胶?跑胶后条带分布如何?

发自小木虫Android客户端
5楼2015-11-21 17:47:49
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