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我听五月天

木虫 (正式写手)

[求助] 用HPLC监控紫杉醇的DMSO溶液浓度会不会随时间变化,应该用峰面积还是峰高作参考? 已有7人参与

实验需要用的紫杉醇DMSO溶液,每次实验时稀释使用,为了保证溶液质量,每次使用时用HPLC检测紫杉醇浓度。
查了文献后决定条件定为
56微克/毫升的溶液进样5微升;
1毫升每分钟,乙腈/水=35/65;
25-40度不控制温度;
检测器227纳米。
文献里10分钟以后出峰,我做的2.6分钟出峰,峰高接近3000,面积5.7*e4。连续进了三次样,结果一致性很好。
紧接着没有平衡就换成乙腈/水=25/75(好久不做液相了,为了让他晚点儿出峰竟然。。。)进样一次,2.6分钟出峰,峰高接近3000,面积4.0*e4。
。。。。。。。。。。。。
过了一星期多,用乙腈/水=35/65,2.6分钟出峰,峰高接近3000,面积4.7*e4.
额。。。醉了,不知道怎么判定浓度了。
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为爱而生
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klicking

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
楼主好 估计你三次观察到的峰都是溶剂峰,不可能是紫杉醇的峰,在你的条件下出峰时间不会这么早的,除非是UPLC,HPLC一般会控制出峰时间在3分钟以后,我做的一般控制在5分钟左右以后;建议楼主,运行时间延长(柱子短可以走到25分钟试试看,长柱子建议走40分钟以上)试试看,尤其是色谱柱是250mm时,最好用个梯度,最后把乙腈比例调为90%走了看看。
归零
2楼2014-10-12 09:02:41
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klicking

至尊木虫 (著名写手)

补充一个问题,定量肯定使用峰面积,用峰高的很少,峰高要求峰的对称性在0.95 - 1.05之间,这个要求有点高了。
归零
3楼2014-10-12 09:25:50
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liwentao2010

荣誉版主 (文坛精英)

山涛

优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
我听五月天: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-10-12 11:08:37
建议楼主重新考虑一下流动相配制,前几分钟杂峰比较多,干扰性强,最好出峰时间再向后延迟一些。此外,峰高或峰面积都可以作为标准判断,比如UV依赖于吸光度值等,但是这与物质种类有关,若是峰型好,规则而峰尖,都可以,反之最好选择积分面积比较好一些。(个人看法,仅供参考)
加油!
4楼2014-10-12 09:53:36
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yemu159

新虫 (小有名气)

DMSO不能做液相的溶剂,2.6分钟可能是DMSO的溶剂峰。
高山仰止,厚德载物
20楼2014-10-14 09:26:38
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普通回帖

我听五月天

木虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by liwentao2010 at 2014-10-12 09:53:36
建议楼主重新考虑一下流动相配制,前几分钟杂峰比较多,干扰性强,最好出峰时间再向后延迟一些。此外,峰高或峰面积都可以作为标准判断,比如UV依赖于吸光度值等,但是这与物质种类有关,若是峰型好,规则而峰尖,都 ...

跟我在其他地方看到的说法一样!谢谢。峰型不尖
为爱而生
5楼2014-10-12 11:09:42
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我听五月天

木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by klicking at 2014-10-12 09:02:41
楼主好 估计你三次观察到的峰都是溶剂峰,不可能是紫杉醇的峰,在你的条件下出峰时间不会这么早的,除非是UPLC,HPLC一般会控制出峰时间在3分钟以后,我做的一般控制在5分钟左右以后;建议楼主,运行时间延长(柱子 ...

谢谢!我用的250mm柱子。我前面提到了连续进样四次的,每次都是走了10分钟多,没有出现别的峰。。。也是不能说明这是紫杉醇啊!?

我再试试
为爱而生
6楼2014-10-12 11:18:11
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klicking

至尊木虫 (著名写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 我听五月天 at 2014-10-12 11:18:11
谢谢!我用的250mm柱子。我前面提到了连续进样四次的,每次都是走了10分钟多,没有出现别的峰。。。也是不能说明这是紫杉醇啊!?

我再试试...

是的,把把运行时间延长一下看看,我看文献在5-25分钟出峰,流动相有用到80比例的
归零
7楼2014-10-12 11:21:00
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archbishop

禁虫 (职业作家)

优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
用峰面积作为判定的标准。你这种情况建议使用梯度洗脱。
雲幕低垂映桂子,江月留白問柳心。
8楼2014-10-12 13:28:13
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我听五月天

木虫 (正式写手)

内容已删除
为爱而生
9楼2014-10-12 14:35:01
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至尊木虫 (著名写手)

内容已删除
归零
10楼2014-10-12 14:58:29
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