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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » 用HPLC监控紫杉醇的DMSO溶液浓度会不会随时间变化，应该用峰面积还是峰高作参考？
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我听五月天

木虫 (正式写手)

[求助] 用HPLC监控紫杉醇的DMSO溶液浓度会不会随时间变化，应该用峰面积还是峰高作参考？已有7人参与

实验需要用的紫杉醇DMSO溶液，每次实验时稀释使用，为了保证溶液质量，每次使用时用HPLC检测紫杉醇浓度。
查了文献后决定条件定为
56微克/毫升的溶液进样5微升;
1毫升每分钟，乙腈/水=35/65;
25-40度不控制温度;
检测器227纳米。
文献里10分钟以后出峰，我做的2.6分钟出峰，峰高接近3000，面积5.7*e4。连续进了三次样，结果一致性很好。
紧接着没有平衡就换成乙腈/水=25/75（好久不做液相了，为了让他晚点儿出峰竟然。。。）进样一次，2.6分钟出峰，峰高接近3000，面积4.0*e4。
。。。。。。。。。。。。
过了一星期多，用乙腈/水=35/65，2.6分钟出峰，峰高接近3000，面积4.7*e4.
额。。。醉了，不知道怎么判定浓度了。
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为爱而生
1楼2014-10-12 08:38:48
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

klicking

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
楼主好 估计你三次观察到的峰都是溶剂峰，不可能是紫杉醇的峰，在你的条件下出峰时间不会这么早的，除非是UPLC，HPLC一般会控制出峰时间在3分钟以后，我做的一般控制在5分钟左右以后；建议楼主，运行时间延长（柱子短可以走到25分钟试试看，长柱子建议走40分钟以上）试试看，尤其是色谱柱是250mm时，最好用个梯度，最后把乙腈比例调为90%走了看看。
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2楼2014-10-12 09:02:41
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klicking

至尊木虫 (著名写手)
补充一个问题，定量肯定使用峰面积，用峰高的很少，峰高要求峰的对称性在0.95 - 1.05之间，这个要求有点高了。
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3楼2014-10-12 09:25:50
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liwentao2010

荣誉版主 (文坛精英)

山涛

优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
我听五月天: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-10-12 11:08:37
建议楼主重新考虑一下流动相配制，前几分钟杂峰比较多，干扰性强，最好出峰时间再向后延迟一些。此外，峰高或峰面积都可以作为标准判断，比如UV依赖于吸光度值等，但是这与物质种类有关，若是峰型好，规则而峰尖，都可以，反之最好选择积分面积比较好一些。（个人看法，仅供参考）
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加油！
4楼2014-10-12 09:53:36
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yemu159

新虫 (小有名气)
DMSO不能做液相的溶剂，2.6分钟可能是DMSO的溶剂峰。
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高山仰止，厚德载物
20楼2014-10-14 09:26:38
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普通回帖

我听五月天

木虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by liwentao2010 at 2014-10-12 09:53:36
建议楼主重新考虑一下流动相配制，前几分钟杂峰比较多，干扰性强，最好出峰时间再向后延迟一些。此外，峰高或峰面积都可以作为标准判断，比如UV依赖于吸光度值等，但是这与物质种类有关，若是峰型好，规则而峰尖，都 ...

跟我在其他地方看到的说法一样！谢谢。峰型不尖
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为爱而生
5楼2014-10-12 11:09:42
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我听五月天

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by klicking at 2014-10-12 09:02:41
楼主好 估计你三次观察到的峰都是溶剂峰，不可能是紫杉醇的峰，在你的条件下出峰时间不会这么早的，除非是UPLC，HPLC一般会控制出峰时间在3分钟以后，我做的一般控制在5分钟左右以后；建议楼主，运行时间延长（柱子 ...

谢谢！我用的250mm柱子。我前面提到了连续进样四次的，每次都是走了10分钟多，没有出现别的峰。。。也是不能说明这是紫杉醇啊！？

我再试试
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为爱而生
6楼2014-10-12 11:18:11
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klicking

至尊木虫 (著名写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 我听五月天 at 2014-10-12 11:18:11
谢谢！我用的250mm柱子。我前面提到了连续进样四次的，每次都是走了10分钟多，没有出现别的峰。。。也是不能说明这是紫杉醇啊！？

我再试试...

是的，把把运行时间延长一下看看，我看文献在5-25分钟出峰，流动相有用到80比例的
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7楼2014-10-12 11:21:00
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archbishop

禁虫 (职业作家)

优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
用峰面积作为判定的标准。你这种情况建议使用梯度洗脱。
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雲幕低垂映桂子，江月留白問柳心。
8楼2014-10-12 13:28:13
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我听五月天

木虫 (正式写手)
内容已删除
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为爱而生
9楼2014-10-12 14:35:01
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klicking

至尊木虫 (著名写手)
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10楼2014-10-12 14:58:29
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