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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 培养/筛选 » 大肠杆菌的活化
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夏夜微风

木虫 (正式写手)

[求助] 大肠杆菌的活化 已有8人参与

之前-80℃甘油管保存了两年的大肠杆菌菌种，我是这样活化的：取100ul甘油菌涂布在LB平板上，37℃ 24h培养，出现很多很小的菌落，我觉得太小了，就再培养24h，然后再取单菌落进行斜面培养24h，然后取出斜面培养菌一接种环进LB液体培养（20ml培养液进250ml锥形瓶），培养12h（锥形瓶口我是用两层脱脂纱布包好一团脱脂棉制成的塞塞住的），发现菌液变浑浊（没有加菌体的菌液是黄色澄清的，没有变化），我就再取液体培养的菌体进行涂布平板培养24h，发现没有菌落产生！！这是怎么回事，是不是液体培养时塞瓶口的方法不对，还是染菌了，但是如果染菌了，再涂布平板培养的时候应该有菌落啊。大家一般用的方法是怎样的啊，就详细解答，谢谢！！
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还未成熟，就已老去！
1楼 2014-10-06 22:22:57
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Crocodile-YK

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
夏夜微风: 金币+1 2014-10-08 08:59:59
涂布棒没有充分冷却，把菌杀死了。在液体LB里面长浓已经说明有菌了，你注意一下涂布的操作，看有改观没有。仅供参考。
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自然如此美丽！
2楼2014-10-07 07:36:36
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blckly

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我也觉得是菌液涂布那一步出了问题，检查一下是不是接种环、涂布棒太烫，烫死了，或者平板营养是不是有问题，或者多取一点菌液涂布。
既然菌液浑浊，平板上不应该不长的。
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3楼2014-10-07 11:02:13
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馨-馨

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
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laozuzunzhe: 金币+1, 鼓励应助！ 2014-10-08 08:11:22
夏夜微风: 金币+1 2014-10-08 08:59:40
第一，是涂布棒烫死了；
第二，你培养基加没加抗生素，没加抗生素的话，是不是培养基问题；加抗生素了，是不是抗生素浓度加错了。
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4楼2014-10-07 13:20:11
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夏夜微风

木虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 馨-馨 at 2014-10-07 13:20:11
第一，是涂布棒烫死了；
第二，你培养基加没加抗生素，没加抗生素的话，是不是培养基问题；加抗生素了，是不是抗生素浓度加错了。

涂布烫死倒是确定不会。
制备LB液体培养基和LB固体培养基是同时的，只是在加琼脂的时候分开了，一半加琼脂一半不加琼脂。从液体培养基中直接取原菌液（不稀释）进行涂布是不是对菌体的生长有影响啊？
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还未成熟，就已老去！
5楼2014-10-07 23:11:11
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单体化合物

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
大肠杆菌说，疼，疼死我了，我想活，别烫死我！

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6楼2014-10-07 23:39:44
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sunshine436

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
夏夜微风: 金币+1 2014-10-08 08:59:05
培养48小时的菌很可能是杂菌，建议甘油菌划线，培养过夜就结菌，大肠杆菌长得挺快的

[ 发自小木虫客户端 ]
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7楼2014-10-08 06:54:54
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夏夜微风

木虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by sunshine436 at 2014-10-08 06:54:54
培养48小时的菌很可能是杂菌，建议甘油菌划线，培养过夜就结菌，大肠杆菌长得挺快的

嗯，但是长了杂菌涂布也应该是有菌落的吧。
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还未成熟，就已老去！
8楼2014-10-08 08:59:06
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夏夜微风

木虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 单体化合物 at 2014-10-07 23:39:44
大肠杆菌说，疼，疼死我了，我想活，别烫死我！

9楼2014-10-08 08:59:31
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夏夜微风

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by Crocodile-YK at 2014-10-07 07:36:36
涂布棒没有充分冷却，把菌杀死了。在液体LB里面长浓已经说明有菌了，你注意一下涂布的操作，看有改观没有。仅供参考。

我再试试涂布。
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还未成熟，就已老去！
10楼2014-10-08 09:00:18
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