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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 培养/筛选 » 大肠杆菌的活化
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selt

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
直接LB平板划线培养20h左右就可以了呀，我们一般不用涂布棒的，用灭菌枪头吸菌液后划线，不用担心会烫死。
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11楼2014-10-08 09:35:09
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陈_劼_翔

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
夏夜微风: 金币+1 2014-10-08 14:06:17
棉塞用的棉花要是非脱脂棉，脱脂棉透气性不好。涂布没菌可能稀释倍数不对，可以镜检用计数板计数帮助判断到底要稀释多少倍。如果不是为了计数，直接用接种环沾发酵液划线就行。
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这是签名~
12楼2014-10-08 10:58:06
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馨-馨

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
夏夜微风: 金币+1 2014-10-08 14:05:26
引用回帖:
5楼: Originally posted by 夏夜微风 at 2014-10-07 23:11:11
涂布烫死倒是确定不会。
制备LB液体培养基和LB固体培养基是同时的，只是在加琼脂的时候分开了，一半加琼脂一半不加琼脂。从液体培养基中直接取原菌液（不稀释）进行涂布是不是对菌体的生长有影响啊？...

看你这样说，你的培养基肯定是不加抗生素的，那么，你培养时间48h,时间太长了，可能会染菌；还有你直接用液体培养的菌涂板，菌浓度过高，一般都是要稀释后才能涂板，或者是直接采用划线分离单菌落。
个人建议，你从-80拿出来的菌，直接通过连续的几次划线分离单菌落后，在液体培养就可以了。
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13楼2014-10-08 13:04:54
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夏夜微风

木虫 (正式写手)
引用回帖:
13楼: Originally posted by 馨-馨 at 2014-10-08 13:04:54
看你这样说，你的培养基肯定是不加抗生素的，那么，你培养时间48h,时间太长了，可能会染菌；还有你直接用液体培养的菌涂板，菌浓度过高，一般都是要稀释后才能涂板，或者是直接采用划线分离单菌落。
个人建议，你 ...

我也觉得要稀释，今早就做了个划线培养，菌还没有长出来。
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还未成熟，就已老去！
14楼2014-10-08 14:05:18
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夏夜微风

木虫 (正式写手)
引用回帖:
12楼: Originally posted by 陈_劼_翔 at 2014-10-08 10:58:06
棉塞用的棉花要是非脱脂棉，脱脂棉透气性不好。涂布没菌可能稀释倍数不对，可以镜检用计数板计数帮助判断到底要稀释多少倍。如果不是为了计数，直接用接种环沾发酵液划线就行。

嗯，试试看。
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还未成熟，就已老去！
15楼2014-10-08 14:06:13
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夏夜微风

木虫 (正式写手)
引用回帖:
11楼: Originally posted by selt at 2014-10-08 09:35:09
直接LB平板划线培养20h左右就可以了呀，我们一般不用涂布棒的，用灭菌枪头吸菌液后划线，不用担心会烫死。

用灭菌枪头吸菌液划线？不能用接种环直接沾菌液划线吗？
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还未成熟，就已老去！
16楼2014-10-08 14:07:45
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阿里郎爱阿里

铜虫 (正式写手)
长时间保存的菌种复苏还是直接接液体培养基的好，大肠杆菌48小时还没长起来说明活性已经很低了。不知道你取了多少菌液涂布，建议这种情况可以多加一些。另外，确定你活化的时候取的100微升是菌液而不只是甘油？
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17楼2014-10-09 11:21:02
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selt

新虫 (小有名气)
引用回帖:
16楼: Originally posted by 夏夜微风 at 2014-10-08 14:07:45
用灭菌枪头吸菌液划线？不能用接种环直接沾菌液划线吗？...

可以呀，只是接种环要烧，可能会把菌烫死，而且也麻烦。
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18楼2014-10-09 11:56:38
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夏夜微风

木虫 (正式写手)
引用回帖:
17楼: Originally posted by 阿里郎爱阿里 at 2014-10-09 11:21:02
长时间保存的菌种复苏还是直接接液体培养基的好，大肠杆菌48小时还没长起来说明活性已经很低了。不知道你取了多少菌液涂布，建议这种情况可以多加一些。另外，确定你活化的时候取的100微升是菌液而不只是甘油？

我是拿甘油菌直接在平板上涂布，长出菌体后再取单菌落菌进行划线，然后再取单菌落进行斜面，最后用斜面菌一环进行液体培养，37℃，200r/min，分别取培养了8h，10h，24h的菌50ul进行平板涂布，培养过夜不长菌，24h也不长菌。
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还未成熟，就已老去！
19楼2014-10-09 14:08:15
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流水不争

铁杆木虫 (正式写手)

小木虫

【答案】应助回帖

甘油管里的菌划线 活化 不充分 建议用液体 LB
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20楼2015-01-24 10:15:51
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