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夏夜微风

木虫 (正式写手)

[求助] 大肠杆菌的活化 已有8人参与

之前-80℃甘油管保存了两年的大肠杆菌菌种,我是这样活化的:取100ul甘油菌涂布在LB平板上,37℃ 24h培养,出现很多很小的菌落,我觉得太小了,就再培养24h,然后再取单菌落进行斜面培养24h,然后取出斜面培养菌一接种环进LB液体培养(20ml培养液进250ml锥形瓶),培养12h(锥形瓶口我是用两层脱脂纱布包好一团脱脂棉制成的塞塞住的),发现菌液变浑浊(没有加菌体的菌液是黄色澄清的,没有变化),我就再取液体培养的菌体进行涂布平板培养24h,发现没有菌落产生!!这是怎么回事,是不是液体培养时塞瓶口的方法不对,还是染菌了,但是如果染菌了,再涂布平板培养的时候应该有菌落啊。大家一般用的方法是怎样的啊,就详细解答,谢谢!!
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还未成熟,就已老去!
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馨-馨

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


夏夜微风: 金币+1 2014-10-08 14:05:26
引用回帖:
5楼: Originally posted by 夏夜微风 at 2014-10-07 23:11:11
涂布烫死倒是确定不会。
制备LB液体培养基和LB固体培养基是同时的,只是在加琼脂的时候分开了,一半加琼脂一半不加琼脂。从液体培养基中直接取原菌液(不稀释)进行涂布是不是对菌体的生长有影响啊?...

看你这样说,你的培养基肯定是不加抗生素的,那么,你培养时间48h,时间太长了,可能会染菌;还有你直接用液体培养的菌涂板,菌浓度过高,一般都是要稀释后才能涂板,或者是直接采用划线分离单菌落。
个人建议,你从-80拿出来的菌,直接通过连续的几次划线分离单菌落后,在液体培养就可以了。
13楼2014-10-08 13:04:54
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Crocodile-YK

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
夏夜微风: 金币+1 2014-10-08 08:59:59
涂布棒没有充分冷却,把菌杀死了。在液体LB里面长浓已经说明有菌了,你注意一下涂布的操作,看有改观没有。仅供参考。
自然如此美丽!
2楼2014-10-07 07:36:36
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blckly

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我也觉得是菌液涂布那一步出了问题,检查一下是不是接种环、涂布棒太烫,烫死了,或者平板营养是不是有问题,或者多取一点菌液涂布。
既然菌液浑浊,平板上不应该不长的。
3楼2014-10-07 11:02:13
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馨-馨

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+1, 鼓励应助! 2014-10-08 08:11:22
夏夜微风: 金币+1 2014-10-08 08:59:40
第一,是涂布棒烫死了;
第二,你培养基加没加抗生素,没加抗生素的话,是不是培养基问题;加抗生素了,是不是抗生素浓度加错了。
4楼2014-10-07 13:20:11
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