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夏夜微风

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[求助] 大肠杆菌的活化已有8人参与

之前-80℃甘油管保存了两年的大肠杆菌菌种，我是这样活化的：取100ul甘油菌涂布在LB平板上，37℃ 24h培养，出现很多很小的菌落，我觉得太小了，就再培养24h，然后再取单菌落进行斜面培养24h，然后取出斜面培养菌一接种环进LB液体培养（20ml培养液进250ml锥形瓶），培养12h（锥形瓶口我是用两层脱脂纱布包好一团脱脂棉制成的塞塞住的），发现菌液变浑浊（没有加菌体的菌液是黄色澄清的，没有变化），我就再取液体培养的菌体进行涂布平板培养24h，发现没有菌落产生！！这是怎么回事，是不是液体培养时塞瓶口的方法不对，还是染菌了，但是如果染菌了，再涂布平板培养的时候应该有菌落啊。大家一般用的方法是怎样的啊，就详细解答，谢谢！！

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还未成熟，就已老去！

1楼 2014-10-06 22:22:57

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夏夜微风

木虫 (正式写手)

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引用回帖:

17楼: Originally posted by 阿里郎爱阿里 at 2014-10-09 11:21:02
长时间保存的菌种复苏还是直接接液体培养基的好，大肠杆菌48小时还没长起来说明活性已经很低了。不知道你取了多少菌液涂布，建议这种情况可以多加一些。另外，确定你活化的时候取的100微升是菌液而不只是甘油？

我是拿甘油菌直接在平板上涂布，长出菌体后再取单菌落菌进行划线，然后再取单菌落进行斜面，最后用斜面菌一环进行液体培养，37℃，200r/min，分别取培养了8h，10h，24h的菌50ul进行平板涂布，培养过夜不长菌，24h也不长菌。