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qq415625475

铁虫 (初入文坛)

[求助] 磁珠法提取细菌DNA纯度较低,求助 已有1人参与

如下表所示,我用核酸提取仪,提取大肠杆菌的核酸,A1-D1加入裂解液和离心后的细菌,A2-D2加入磁珠和结合液,3排到5排加入70%乙醇,A6-D6加入洗脱液。
但是核酸的浓度虽然不低,但是核酸的纯度,太低了,我想请问一下,什么方法可以提高细菌DNA的出纯度?
   1         2        3        4        5        6
A                                               
B                                               
C                                               
D                                               

Sample ID        Date          ng/ul            A260        A280        260/280        260/230       
A6                2014/9/18        296.49        5.93               4.575          1.3                0.87       
B6                2014/9/18        323.82        6.476        4.999        1.3                0.96               
C6                2014/9/18        256.57        5.131        4.023        1.28         0.81       
D6                2014/9/18        233.85        4.677        3.684        1.27                0.76
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yubeihong

铁杆木虫 (职业作家)


磁珠不好,我们也遇到过,后来换了purimag家的磁珠,虽然提取量低了10%,但纯度非常好

发自小木虫IOS客户端
3楼2017-05-05 21:08:57
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Harrylujah

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

没用过提取仪,不过A280高的话,蛋白污染应该比较大,增长proteinase k的孵育时间。A230那边你有没有直接拿磁珠溶液进行OD看各项数据,我自己做的NTC磁珠提取液A230、A260很高的,也就是说磁珠本身对吸光度有影响的。你最好确认一下提取液有没有磁珠残留,以及磁珠自身对OD的影响。个人认为试剂残留的影响不多的,怕WB残留可以多airdry一段时间
2楼2014-09-30 16:11:46
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