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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 磁珠法提取细菌DNA纯度较低，求助
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qq415625475

铁虫 (初入文坛)

[求助] 磁珠法提取细菌DNA纯度较低，求助 已有1人参与

如下表所示，我用核酸提取仪，提取大肠杆菌的核酸，A1-D1加入裂解液和离心后的细菌，A2-D2加入磁珠和结合液，3排到5排加入70%乙醇，A6-D6加入洗脱液。
但是核酸的浓度虽然不低，但是核酸的纯度，太低了，我想请问一下，什么方法可以提高细菌DNA的出纯度？
   1         2        3        4        5        6
A                                               
B                                               
C                                               
D                                               

Sample ID        Date          ng/ul            A260        A280        260/280        260/230       
A6                2014/9/18        296.49        5.93               4.575          1.3                0.87       
B6                2014/9/18        323.82        6.476        4.999        1.3                0.96               
C6                2014/9/18        256.57        5.131        4.023        1.28         0.81       
D6                2014/9/18        233.85        4.677        3.684        1.27                0.76
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1楼 2014-09-21 19:08:08
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yubeihong

铁杆木虫 (职业作家)
磁珠不好，我们也遇到过，后来换了purimag家的磁珠，虽然提取量低了10%，但纯度非常好

发自小木虫IOS客户端
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3楼2017-05-05 21:08:57
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Harrylujah

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

没用过提取仪，不过A280高的话，蛋白污染应该比较大，增长proteinase k的孵育时间。A230那边你有没有直接拿磁珠溶液进行OD看各项数据，我自己做的NTC磁珠提取液A230、A260很高的，也就是说磁珠本身对吸光度有影响的。你最好确认一下提取液有没有磁珠残留，以及磁珠自身对OD的影响。个人认为试剂残留的影响不多的，怕WB残留可以多airdry一段时间
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2楼2014-09-30 16:11:46
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